基于流式細(xì)胞術(shù)的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎實驗研究.pdf

1、目的：建立外周血T淋巴細(xì)胞TCR亞家族檢測方法，研究TCR亞家族檢測的臨床意義，并在此基礎(chǔ)上探討有效的中藥復(fù)方可能的作用機(jī)制。
　　方法：根據(jù)抗原-抗體特異性結(jié)合的基本免疫學(xué)原理，利用多重抗體熒光染色技術(shù)，通過流式細(xì)胞儀檢測分析CD3、CD4、CD8、CD95、CD69、TCR、Annexin V等標(biāo)志性抗體的光電信號強(qiáng)度，建立設(shè)門策略，對外周血中的淋巴細(xì)胞進(jìn)行檢測分析。通過不同的臨床分組，對該方法所檢指標(biāo)的臨床意義進(jìn)行討論。在此

2、基礎(chǔ)上對確有療效的中藥復(fù)方的可能作用機(jī)制進(jìn)行研究。
　　結(jié)果：⑴正常人群外周血中T淋巴細(xì)胞各TCR亞家族細(xì)胞所占比例不同，但各群細(xì)胞都可被檢測。⑵正常人群外周血中，與Annexin V分子結(jié)合的T淋巴細(xì)胞中CD95+CD69+T所占比例最高。⑶類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的患者，外周血T淋巴細(xì)胞TCR亞家族中Vβ12、Vβ20及CD4+Vβ9亞家族細(xì)胞所占比例與正常人群相比差異明顯（P<0.05）,與系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者相比CD8+Vβ14、C8+

3、Vβ4所占比例與正常人群相比差異明顯（P<0.05）；外周血T淋巴細(xì)胞中，CD95+T細(xì)胞、CD69+T細(xì)胞所占比例與正常人群相比無明顯差異（P>0.05），與系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者相比差異明顯（P>0.05）。⑷不同病程階段的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周T血淋巴細(xì)胞TCR亞家族中，Vβ12亞家族細(xì)胞所占比例差異明顯（P<0.05）。⑸中藥復(fù)方治療前后，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血T淋巴細(xì)胞TCR亞家族中，Vβ7.1、Vβ18、Vβ8、Vβ14等亞家族所

4、占比例的變化差異明顯（P<0.05）；外周血淋巴細(xì)胞中，與Annexin V分子結(jié)合的T淋巴細(xì)胞中CD95+CD69+T所占比例及CD95+T細(xì)胞中結(jié)合Annexin V分子的細(xì)胞所占比例變化差異明顯（P<0.05）。
　　結(jié)論：①正常人群外周血中T淋巴細(xì)胞各TCR亞家族均有分布。②正常人群中，F(xiàn)as途徑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是T淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡的主要機(jī)制。③不同疾病，外周血中T淋巴細(xì)胞各TCR亞家族的分布不同，Vβ12、Vβ20、CD4