廣州市淡水產(chǎn)品中香港海鷗形菌的檢測和病原學研究.pdf

1、研究目的和內(nèi)容
　　 1.為了解目前廣州市淡水產(chǎn)品中香港海鷗形菌(Laribacter hongkongensis,LH)的攜帶情況,采集廣州市的淡水魚和食用蛙進行LH檢測。
　　 2.為深入闡明LH的病原學特性,進行以下研究:分析LH分離株抗生素耐藥表型；運用脈沖場凝膠電泳(pulsed field gel eleetrophoresis,PFGE)和腸道細菌重復(fù)基因間共有序列(enterobaeterial repe

2、titive intergenic consensus sequence,ERIC)PCR對分離株進行分型分析,評價菌株間的遺傳親緣關(guān)系；分析LH分離株中整合子-基因盒在耐藥傳播中的作用,以及耐藥譜的遺傳多樣性。
　　 研究方法
　　 1.細菌培養(yǎng)分離鑒定方法。
　　 2.細菌16S rRNA基因PCR鑒定法。
　　 3.紙片擴散法確定LH分離株的抗生素敏感性。
　　 4.建立PFGE和ERIC-

3、PCR分型的實驗條件,對分離株進行PFGE和ERIC-PCR分型；采用BioNumerics v4.0軟件中的非加權(quán)配對算數(shù)平均法(UPGMA)進行聚類分析,分析菌株的親緣關(guān)系。
　　 5.PCR擴增法檢測LH分離株中的整合酶基因及基因盒,對基因盒進行測序及比對分析。
　　 研究結(jié)論
　　 1.用尿素酶試驗篩選LH菌株具有很高的靈敏度、特異度和陽性預(yù)測值,是合理的首選生化試驗。
　　 2.8種淡水魚中僅草

4、魚與鳙魚檢出LH,草魚的陽性率為28.1％(66/235),鳙魚為11.1％(3/27)。春季草魚標本的LH檢出率最高,最低為冬季。
　　 3.首次報道中國內(nèi)地6種食用蛙攜帶LH,其中牛蛙、沼蛙、黑框蟾蜍、棘胸蛙攜帶LH未見文獻報道。總陽性率達49.5％(99/200),沼蛙陽性率最高,最低為棘胸蛙。
　　 4.食用蛙LH檢出率高于淡水魚。
　　 5.所有的菌株至少對1個種類的抗生素表現(xiàn)耐藥。大部分分離株對第一、

5、三代頭孢菌素(頭孢他啶除外)表現(xiàn)耐藥,而對第二、四代頭孢菌素表現(xiàn)較低的耐藥性。約2/3的分離株為多重耐藥株。
　　 6.PFGE和ERIC-PCR分型方法具有高重復(fù)性、高分辨率,均可作為LH菌株的基因分型工具,以PFGE分型效果更好。
　　 7.從淡水產(chǎn)品分離的LH菌株,不僅耐藥譜型多樣,而且具有豐富的PFGE和ERIC基因型,表現(xiàn)相當高的種內(nèi)基因多態(tài)性。
　　 8.13株LH分離株/nt//陽性,并攜帶5種不同