水產品中大腸埃希氏菌和大腸菌群快速檢測技術研究.pdf

1、大腸埃希氏菌(Escherichia coli)和大腸菌群(Coliforms)都是判斷水、藥品、食品等是否被糞便污染的重要微生物指標。檢測大腸埃希氏菌和大腸菌群的常規(guī)方法存在耗時長、靈敏度低、特異性差和難于檢測到低活性或活的非可培養(yǎng)菌等缺點，而基于分子生物學技術、免疫學技術、酶學技術等的三種快速檢測技術具有靈敏度高、特異性強、檢測快捷等優(yōu)勢，尤其是酶學技術的快速、經(jīng)濟，非常適合水產品中大腸埃希氏菌和大腸菌群的快速檢測。本實驗室已經(jīng)建立

2、了基于熒光方法的大腸埃希氏菌單管定量檢測技術，為了進一步探討單管定量檢測技術的應用領域，滿足產品上市前快速檢測的需要，本文研究并建立了大腸菌群單管定量檢測技術。在此基礎上，用單管定量檢測技術和傳統(tǒng)方法對實驗室制備的菌懸液、天然海水、水產品中的大腸埃希氏菌和大腸菌群進行了定量檢測，比較2種方法的優(yōu)缺點和檢測結果的可比性，以評估單管定量檢測技術的應用前景。具體內容如下：
　　 通過研究培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)液pH值對大腸菌群生長和培養(yǎng)液吸光

3、度值的影響，確定42℃，培養(yǎng)液pH值7.0～7.5為大腸菌群酶解ONPG產物的吸光度值檢測的最佳條件；通過研究培養(yǎng)時間和接種菌濃度與培養(yǎng)液吸光度值的關系，建立起基于分光光度法的大腸菌群單管定量檢測技術。通過與平板菌落計數(shù)法和最大可能數(shù)法比較發(fā)現(xiàn)單管定量檢測法的相對標準偏差小于這兩種常用的方法，而且更為快速、經(jīng)濟，適合用于大腸菌群的定量檢測。
　　 利用MUG單管定量檢測方法和大腸埃希氏菌多管發(fā)酵法對實驗室制備的菌懸液、天然海水、

4、水產品中的大腸埃希氏菌進行了定量檢測，并比較2種方法的優(yōu)缺點和檢測結果的可比性。檢測結果表明：MUG單管定量檢測法與大腸埃希氏菌多管發(fā)酵法對菌懸液、天然海水、水產品的檢測結果沒有統(tǒng)計學差異；MUG單管定量檢測法檢測數(shù)據(jù)的精確性高于大腸埃希氏菌多管發(fā)酵法，而且更為快速、經(jīng)濟，適用于海水和水產品中大腸埃希氏菌的定量檢測。
　　 利用ONPG單管定量檢測方法和乳糖多管發(fā)酵法對實驗室制備的標準菌的菌懸液、天然海水和水產品中的大腸菌群進行

5、了定量檢測，并比較2種方法的優(yōu)缺點和檢測結果的可比性。研究結果顯示：兩種方法對菌懸液、水樣的檢測結果無統(tǒng)計學差異，ONPG單管定量檢測方法檢測數(shù)據(jù)的準確性、精確性和重現(xiàn)性都高于乳糖多管發(fā)酵法；ONPG單管定量檢測法適合海水中大腸菌群的快速定量檢測，具有很好的應用前景，但由于生物組織等的影響，ONPG單管定量檢測方法能否應用于水產品的檢測有待進一步研究。
　　 綜上所述，MUG單管定量檢測技術適合用于海水和水產品中大腸埃希氏菌的定