水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定和大腸菌群的檢測(cè)

1、水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定和大腸菌群的檢測(cè)（ 水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定和大腸菌群的檢測(cè)（1）錄入時(shí)間:2010-9-25 11:17:29 來源：生物信息網(wǎng)（一)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1)了解和學(xué)習(xí)水中細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群的測(cè)定原理和測(cè)定意義。(2)學(xué)習(xí)和掌握用稀釋平板計(jì)數(shù)法測(cè)定水中細(xì)菌總數(shù)的方法。(3)學(xué)習(xí)和掌握水中大腸菌群的檢測(cè)方法。（二)實(shí)驗(yàn)原理水是微生物廣泛分布的天然環(huán)境。各種天然水中常含有一定數(shù)量的微生物。水中微生物的主要來源有：水中的水生性微生物(如光

2、合藻類)、來自土壤徑流、降雨的外來菌群和來自下水道的污染物和人畜的排泄物等。水中的病原菌主要來源于人和動(dòng)物的傳染性排泄物。水的微生物學(xué)的檢驗(yàn)，特別是腸道細(xì)菌的檢驗(yàn)，在保證飲水安全和控制傳染病上有著重要意義，同時(shí)也是評(píng)價(jià)水質(zhì)狀況的重要指標(biāo)。國家飲用水標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，飲用水中大腸菌群數(shù)每升中不超過 3 個(gè)，細(xì)菌總數(shù)每 mL 不超過 100 個(gè)。所謂細(xì)菌總數(shù)是指 1mL 或 1g 檢樣中所含細(xì)菌菌落的總數(shù)，所用的方法是稀釋平板計(jì)數(shù)法，由于計(jì)算的是平

3、板上形成的菌落(colony-forming unit，cfu)數(shù)，故其單位應(yīng)是 cfu/g(mL)。它反映的是檢樣中活菌的數(shù)量。所謂大腸菌群，是指在 37℃24h 內(nèi)能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣的兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌的總稱，主要由腸桿菌科中四個(gè)屬內(nèi)的細(xì)菌組成，即埃希氏桿菌屬、檸檬酸桿菌屬、克雷伯氏菌屬和腸桿菌屬。水的大腸菌群數(shù)是指 100mL 水檢樣內(nèi)含有的大腸菌群實(shí)際數(shù)值，以大腸菌群最近似數(shù)(MPN)表示。在正常情況下，腸道中主要

4、有大腸菌群、糞鏈球菌和厭氧芽胞桿菌等多種細(xì)菌。這些細(xì)菌都可隨人畜排泄物進(jìn)入水源，由于大腸菌群在腸道內(nèi)數(shù)量最多，所以，水源中大腸菌群的數(shù)量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一項(xiàng)重要指標(biāo)。目前，國際上已公認(rèn)大腸菌群的存在是糞便污染的指標(biāo)。因而對(duì)飲用水必須進(jìn)行大腸菌群的檢查。水中大腸菌群的檢驗(yàn)方法，常用多管發(fā)酵法和濾膜法。多管發(fā)酵法可運(yùn)用于各種水樣的檢驗(yàn)，但操作繁瑣，需要時(shí)間長。濾膜法僅適用于自來水和深井水，操作簡(jiǎn)單、快速，但不適用于雜質(zhì)較多

5、、易于阻塞(2)細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定：1)水樣稀釋及培養(yǎng)：①按無菌操作法，將水樣作 10 倍系列稀釋：⑦根據(jù)對(duì)水樣污染情況的估計(jì)，選擇 2-3 個(gè)適宜稀釋度(飲用水如自來水、深井水等，一般選擇 1、1:10 兩種濃度；水源水如河水等，比較清潔的可選擇 1:10、1:100、1:1000 三種稀釋度；污染水—被選擇 1:100、1:1000、1:10000 三種稀釋度)，吸取 1mL 稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度作 3 個(gè)重復(fù)。③將熔化后保溫

6、度 45℃的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基倒平皿，每皿約 15mL，并趁熱轉(zhuǎn)動(dòng)平皿混合均勻。④待瓊脂凝固后，將平皿倒置于 37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 24±1h 后取出，計(jì)算平皿內(nèi)菌落數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，即得 1mL 水樣中所含的細(xì)菌菌落總數(shù)。2)計(jì)算方法：作平板計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落數(shù)。3)計(jì)數(shù)的報(bào)告：①平板菌落數(shù)的選擇：選取菌落數(shù)在 30-300 之間的平板

7、作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)重復(fù)時(shí)，應(yīng)選取兩個(gè)平板的平均數(shù)。如果一個(gè)平板有較大片狀菌落生長時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板計(jì)數(shù)作為該稀釋度的菌數(shù)。若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，可計(jì)算半個(gè)平板后乘2 以代表整個(gè)平板的菌落數(shù)。②稀釋度的選擇：a. 應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在 30-300 之間的稀釋度，乘以該稀釋倍數(shù)報(bào)告之(表 1 例 1)。b．若有兩個(gè)稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在 30-300 之間，