羅格列酮對(duì)肝星狀細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及其作用機(jī)制淺析.pdf

1、目的：觀察羅格列酮對(duì)體外培養(yǎng)肝星狀細(xì)胞（HSC）增殖、凋亡、細(xì)胞周期及超微結(jié)構(gòu)的影響；觀察羅格列酮對(duì)普通培養(yǎng)的HSC和經(jīng)肝癌條件培養(yǎng)基作用后的HSC表達(dá)a-SMA、PDGF-B的影響，初步探討羅格列酮影響HSC生物學(xué)特性的作用機(jī)制。
　　 方法：⑴MTT檢測(cè)不同濃度羅格列酮（0、10、12.5、15、17.5、20μmol/L）無(wú)血清培養(yǎng)基對(duì)HSC增殖的影響。⑵流式細(xì)胞儀（FCM）檢測(cè)不同濃度羅格列酮（0、10、12.5、15、

2、17.5、20μmol/L）無(wú)血清培養(yǎng)基對(duì)HSC細(xì)胞周期和凋亡率的影響。⑶電鏡（TEM）觀察15μmol/L的羅格列酮無(wú)血清培養(yǎng)基對(duì)HSC 超微結(jié)構(gòu)的影響。⑷免疫組化（IHC）半定量檢測(cè)：1）不同濃度羅格列酮（濃度組別與前者相同）無(wú)血清培養(yǎng)基對(duì)HSC表達(dá)a-SMA、PDGF-B的影響；2）HSC 經(jīng)24h 肝癌細(xì)胞（HCC）條件培養(yǎng)基（按1∶1、1∶2的比例稀釋）處理，再用15μmol/L 羅格列酮作用于HSC（另設(shè)空白對(duì)照組、單純羅格

3、列酮組和單純24h 肝癌細(xì)胞條件培養(yǎng)基組），觀察HSC的a-SMA、PDGF-B表達(dá)變化。上述免疫組化結(jié)果用計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)進(jìn)行半定量分析。
　　 結(jié)果：①M(fèi)TT結(jié)果顯示：羅格列酮對(duì)HSC的增殖具有抑制作用，抑制率隨著羅格列酮濃度的增加而增加，兩者呈量效依賴關(guān)系。②FCM結(jié)果顯示：經(jīng)不同濃度羅格列酮作用后，HSC的凋亡率、G0/G1 期細(xì)胞比例均隨著濃度的增加而增加，各濃度組凋亡率的增加均具有非常顯著意義（P＜0.01），羅格

4、列酮濃度高于15μmol/L時(shí)，G0/G1 期細(xì)胞比例增加具有顯著意義（P＜0.05）。③透射電鏡觀察，經(jīng)羅格列酮作用后，HSC的生長(zhǎng)狀態(tài)受到抑制，部分細(xì)胞呈現(xiàn)凋亡相關(guān)的超微結(jié)構(gòu)改變，如細(xì)胞體積變小，表面絨毛結(jié)構(gòu)減少或消失，核染色質(zhì)凝集并邊集，核固縮，并可見(jiàn)凋亡小體。④免疫組化結(jié)果顯示：羅格列酮作用于HSC后，其a-SMA、PDGF-B的表達(dá)水平隨羅格列酮濃度的增加而減少，且兩者的表達(dá)具有緊密相關(guān)性（r=0.971）；羅格列酮作用于經(jīng)肝