PPARγ特異配體羅格列酮對(duì)肝星狀細(xì)胞MMPs、TIMPs及膠原表達(dá)影響.pdf

1、目的：肝纖維化是多種慢性肝損傷的共同后果，進(jìn)一步則發(fā)展為肝硬化甚至肝癌，是一類世界性的嚴(yán)重危害人們健康的主要疾病。現(xiàn)已知肝纖維化是一個(gè)可逆性病變，而肝硬化是不可逆的?；罨母涡菭罴?xì)胞（hepatic stellate cell，HSC）是肝纖維化發(fā)生的核心環(huán)節(jié)?；罨腍SC通過旁分泌與自分泌作用合成分泌多種細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrixes，ECM），同時(shí)合成、釋放大量基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制物（tissue inh

2、ibitors of metalloproteinases，TIMPs），抑制膠原酶、明膠酶等基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）活性，減少ECM降解，導(dǎo)致ECM合成大于降解，最終過量積聚在肝內(nèi)形成肝纖維化。過氧化物酶體增殖物活化受體γ（peroxisome proliferators-activated receptor gamma，PPARγ）是一種配體激活的核受體轉(zhuǎn)錄因子，與肝纖維化之間關(guān)

3、系的研究主要集中于PPARγ與HSC激活之間的關(guān)系上。研究證實(shí)，靜止?fàn)顟B(tài)HSC表達(dá)PPARγ，而活動(dòng)狀態(tài)的HSC表達(dá)PPAR7明顯減少，PPARγ在維持HSC作為靜止?fàn)顟B(tài)的表型上具有重要作用，PPARγ表達(dá)減少與HSC激活密切相關(guān)。PPARγ及其配體在肝纖維化形成中的作用已成為肝纖維化研究領(lǐng)域里的一個(gè)新熱點(diǎn)，但其具體機(jī)制尚不完全清楚。目前認(rèn)為PPARγ配體作為PPARγ的激動(dòng)劑，可抑制HSC的增殖，減少肝內(nèi)膠原積聚和增加肝內(nèi)膠原酶活性。

4、本研究旨在探討不同濃度的PPARγ特異配體羅格列酮對(duì)HSC合成基質(zhì)金屬蛋白酶、金屬蛋白酶組織抑制物及膠原的影響，以期進(jìn)一步證實(shí)PPARγ對(duì)HSC生物學(xué)特性的影響，對(duì)研究肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制及臨床治療具有重要的意義。
　　 方法：①細(xì)胞培養(yǎng)：用含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)HSC-T6，傳4-5代后接種于塑料細(xì)胞培養(yǎng)瓶，換用無胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后分組。分為A組：空白對(duì)照組；B組：5umol/L羅格列酮

5、組；C組：10umol/L羅格列酮組；D組：15umol/L羅格列酮組；E組：20umol/L羅格列酮組。分別于培養(yǎng)24h后收取細(xì)胞。每組均培養(yǎng)6瓶。
　　 ②檢測不同濃度組MMPS、TIMPs及膠原的改變。用TR-izol試劑盒，參照說明抽提細(xì)胞的總RNA。利用半定量RT-PCR測定MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、COLⅠ、COLⅢ mRNA水平的表達(dá)。瓊脂糖凝膠電泳后使用Quantity One圖像分析系

6、統(tǒng)分析。
　　 ③數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析：檢測值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：TIMP-1的含量A>B>C>D>E；TIMP-2：A>B>C>D>E：COLⅠ：A>B>C>D>E；COLⅢ：A>B>C>D>E；MMP-2：A

7、的表達(dá)，抑制HSC表達(dá)TIMP-1、TIMP-2、COLⅠ、COLⅢ（P<0.01），并在一定范圍內(nèi)，呈劑量依賴性（P<0.01）。
　　 結(jié)論：羅格列酮通過上調(diào)PPARγ可以抑制HSC的增殖與活化，下調(diào)TIMPs的表達(dá)，增強(qiáng)MMPs的活性，從而增加ECM的降解，促進(jìn)HSC凋亡，逆轉(zhuǎn)肝纖維化。因此，PPARγ對(duì)HSC活化的分子調(diào)節(jié)在肝纖維化發(fā)生中起著重要作用，隨著對(duì)PPARγ在肝纖維化中調(diào)節(jié)作用的深入研究，將為肝纖維化的治療提供