當歸芍藥散活性部位JD-30對Alzheimer病模型動物學習記憶功能的影響及機制研究.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一種嚴重危害人類健康的神經(jīng)退行性疾病。由于其病因和發(fā)病機制復雜,迄今尚不十分清楚,因此尚無理想的防治藥物。
　　當歸芍藥散(Danggui-Shaoyao-San,DSS)是在近年報道較多的在臨床和藥理學研究中對AD均顯示出良好療效的傳統(tǒng)中藥方劑。該方出自東漢張仲景的《金匱要略》,全方由當歸、芍藥、川芎、茯苓、白術和澤瀉6味藥組成。上世紀80年代,日本研究人員首先在臨床

2、發(fā)現(xiàn)DSS對AD有明顯的治療作用。此后,大量報道證實了DSS對包括AD在內(nèi)的多種癡呆患者有明顯的治療作用;動物實驗證明,DSS能改善東莨菪堿、腦缺血損傷等多種原因所致的癡呆模型動物的認知功能障礙;離體組織和細胞實驗表明,DSS對β-淀粉樣蛋白(β-amyloid protein,Aβ)、谷氨酸等誘導的神經(jīng)元損傷具有保護作用。然而,迄今為止,DSS治療AD和改善動物學習記憶功能的物質(zhì)基礎和作用機制尚未明確,尤其是DSS對Aβ這一構成AD最

3、主要特征性病理改變的核心分子的作用尚無系統(tǒng)研究的報道。
　　為此,本研究室在前期已證明DSS具有改善動物學習記憶能力和海馬片突觸可塑性損傷作用的基礎上,與植物化學研究室合作,對DSS進行了分離提取。本研究首先采用離體海馬片觀察了DSS各提取部位對大鼠海馬片CA1區(qū)基礎突觸傳遞和長時程增強(Long-term potentiation,LTP)的影響;進而采用Aβ側(cè)腦室注射小鼠和快速老化模型小鼠(senescence acceler

4、ated mouse,SAM)兩種AD模型動物,觀察了DSS活性部位JD-30對模型動物學習記憶功能障礙和LTP損傷的影響;最后通過觀察JD-30對動物腦內(nèi)Aβ含量、沉積、Aβ生成代謝相關基因表達、神經(jīng)元和突觸損傷的影響,以及JD-30活性成分的作用等探討了JD-30改善學習記憶功能障礙及LTP損傷的作用機理。
　　一、DSS提取部位對大鼠海馬片CA1區(qū)LTP的影響。
　　通過化學提取,獲得了DSS的數(shù)個提取部位,根據(jù)各部位

5、的成分及極性分析,選用了DSS-W、DSS-A-E、DSS-A-N-30和DSS-JD-30四個提取部位進行活性篩選和評價。LTP作為突觸可塑性(synaptic plasticity)的重要表現(xiàn)形式之一,被認為是學習記憶的神經(jīng)生物學基礎,并被廣泛應用于學習記憶的生理學和藥理學研究。本部分研究采用離體大鼠海馬片,觀察了DSS上述提取部位對海馬CA1區(qū)基礎突觸傳遞和LTP的影響,旨在評價各提取部位對海馬神經(jīng)突觸可塑性的藥理學作用。

6、　　研究結果,結合本課題組前期研究已證實的DSS含藥血清對Aβ25-35所致海馬LTP損傷具有保護作用的結果,初步推測,JD-30是DSS中發(fā)揮改善LTP損傷作用的活性部位之一,芍藥苷則可能是JD-30中發(fā)揮此作用的活性成分之一。
　　二、JD-30對AD模型動物學習記憶功能的影響。
　　在上述研究的基礎上,本研究進一步在整體動物上選用了Aβ側(cè)腦室注射小鼠和快速老化模型小鼠兩種AD動物模型對JD-30進行研究,觀察其對動物學

7、習記憶功能障礙的影響。
　　JD-30對Aβ側(cè)腦室注射和SAMP8兩種AD模型動物的空間學習記憶功能障礙具有明顯改善作用,對SAMP8海馬片LTP損傷有明顯的改善作用。進一步證實,JD-30可能是DSS中發(fā)揮益智作用的活性部位之一。
　　三、JD-30改善AD模型動物學習記憶功能的機制研究。
　　為進一步研究JD-30改善AD模型動物學習記憶功能的機制,針對AD發(fā)生發(fā)展的主要病理變化及關鍵分子,本部分研究對前述行為學實

8、驗結束后的動物取腦組織標本,觀察了JD-30對動物腦內(nèi)Aβ含量和淀粉樣蛋白沉積的影響、對腦內(nèi)Aβ生成代謝相關差異基因表達的影響以及對腦內(nèi)神經(jīng)元和突觸損傷的影響,并在體外對JD-30及其主要成分保護細胞損傷的機制進行了初步探討。
　　通過以上研究，本論文主要得出以下結論:
　　1.JD-30對Ap25-35所致大鼠海馬片CA1區(qū)LTP抑制有明顯改善作用，其可能是Dss中改善LTP損傷的活性部位之一。
　　2.JD-30對

9、Ap25-35側(cè)腦室注射小鼠和SAMP8兩種AD模型動物的空間學習記憶功能障礙有明顯的改善作用，對SAMP8海馬片CA1區(qū)的LTP損傷有明顯改善作用。
　　3.調(diào)節(jié)APP基因和IDE基因的異常表達，降低動物腦內(nèi)的Ap含量，減少其沉積，抑制Ap的聚集和纖維化，減輕Ap25-35引起的細胞活力降低和早期凋亡率升高，阻止神經(jīng)元和突觸的損傷，可能是JD-30發(fā)揮改善動物學習記憶功能障礙和LTP損傷的作用途徑之一。
　　4.芍藥普可能