當(dāng)歸芍藥散對(duì)松果體細(xì)胞β-AR通路信號(hào)分子的影響.pdf

1、當(dāng)歸芍藥散(DSS)是我國(guó)沿襲已久的婦科名方。近年來，發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸芍藥散治療老年癡呆有效。它可以提高學(xué)習(xí)記憶和運(yùn)動(dòng)能力，提高膽堿乙?；富钚?，還有抗自由基、調(diào)節(jié)免疫力、調(diào)整下丘腦-垂體-卵巢軸的功能。而褪黑素(MT)是松果體分泌的主要激素。褪黑素具有抗衰老的作用。它影響學(xué)習(xí)記憶功能、清除自由基、抗氧化、調(diào)節(jié)生殖反應(yīng)、增強(qiáng)炎癥免疫反應(yīng)。兩者作用很相似，并且有人發(fā)現(xiàn)白芍有影響松果體免疫調(diào)節(jié)作用，因此我們?cè)O(shè)想DSS抗衰老作用可能通過調(diào)節(jié)MT分泌達(dá)

2、到抗衰老作用。本課題組研究發(fā)現(xiàn)DSS可以提高松果體β-AR含量，增加松果體分泌的MT，而β-AR是調(diào)節(jié)MT分泌的關(guān)鍵介導(dǎo)受體。既然DSS對(duì)這條β-AR通路調(diào)節(jié)MT分泌的起始和結(jié)尾部分有影響，那么為了證實(shí)我們的設(shè)想，DSS能否影響通路中其它一些關(guān)鍵性的信號(hào)分子比如cAMP、Ca2+以及CREB的功能含量，對(duì)于它們的測(cè)定就顯得非常關(guān)鍵。 1、材料與方法:實(shí)驗(yàn)選用S-D大鼠，150-200g，雄性，分四組：白天灌藥組(Dd)、白天對(duì)照

3、組(Wd)、夜晚灌藥組(Dn)、夜晚對(duì)照組(Wn)，分別在15：00和22：00灌胃當(dāng)歸芍藥散水煎液或去離子水3ml(對(duì)照組)。連續(xù)七天，至第七天灌胃后半小時(shí)快速取松果體及抽取血液。松果體用放射免疫方法測(cè)定cAMP含量，用westernblotting測(cè)定環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)。血標(biāo)本在室溫下放置2h，離心取血清，用于松果體細(xì)胞內(nèi)Ca2+的測(cè)定實(shí)驗(yàn)。 測(cè)定松果體細(xì)胞內(nèi)的Ca2+選用S-D大鼠，40-50g，雄性，

4、取松果體細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，用培養(yǎng)的松果體細(xì)胞加入上述所得含DSS的血清后，用激光掃描共聚焦顯微鏡測(cè)定松果體細(xì)胞內(nèi)Ca2+的變化。 2、結(jié)果:(1)DSS對(duì)松果體細(xì)胞內(nèi)cAMP含量的影響 比較于白天對(duì)照組，白天灌藥組松果體細(xì)胞內(nèi)cAMP的含量明顯升高(P＜0.05)。而夜晚灌藥組與夜晚對(duì)照組松果體細(xì)胞內(nèi)的cAMP含量變化不明顯(P＞0.05)。白天對(duì)照組比夜晚對(duì)照組松果體細(xì)胞內(nèi)的cAMP含量明顯增高(P＜0.01)。白天灌

5、藥組比夜晚灌藥組松果體細(xì)胞內(nèi)的cAMP含量明顯增高(P＜0.01)。 (2)DSS對(duì)松果體細(xì)胞內(nèi)Ca2+的影響 白天灌藥組和夜晚灌藥組血清升高松果體細(xì)胞內(nèi)Ca2+分別多于白天對(duì)照組和夜晚對(duì)照組(P＜0.01)。夜晚對(duì)照組血清升高松果體細(xì)胞內(nèi)Ca2+多于白天對(duì)照組(P＜0.05)。夜晚灌藥組血清升高松果體細(xì)胞內(nèi)Ca2+明顯多于白天灌藥組(P＜0.01)。 (3)DSS對(duì)松果體細(xì)胞內(nèi)CREB含量的影響 可以看

6、到白天灌藥組43KD處的CREB蛋白條帶比白天對(duì)照組明顯。 3、結(jié)論:(1)當(dāng)歸芍藥散可以提高大鼠松果體內(nèi)cAMP的含量。 (2)當(dāng)歸芍藥散可以提高大鼠松果體細(xì)胞內(nèi)的Ca2+。 (3)當(dāng)歸芍藥散可以使大鼠松果體CREB表達(dá)提高。 當(dāng)歸芍藥散可以提高大鼠松果體細(xì)胞內(nèi)的cAMP和Ca2+的含量及CREB蛋白的表達(dá)，從而提高松果體細(xì)胞MT的分泌。本實(shí)驗(yàn)認(rèn)為當(dāng)歸芍藥散促進(jìn)松果體細(xì)胞β-AR信號(hào)通路作用是該方劑促進(jìn)