應用間充質(zhì)干細胞治療骨質(zhì)疏松的研究.pdf

1、目的：本研究以兔去勢后骨質(zhì)疏松為模型，研究去勢和老齡化對脂肪源間充質(zhì)干細胞（ASCs）成骨能力的影響，探討應用ASCs治療骨質(zhì)疏松的可行性；研究局部高密度培養(yǎng)骨髓細胞的體內(nèi)外成骨能力，為骨質(zhì)疏松骨折后的組織工程治療提供可能的細胞來源。
　　方法：使用切除雙側(cè)卵巢（去勢手術）的方法建立兔去勢后骨質(zhì)疏松模型，使用X線攝片進行模型效果評價。所有動物在手術前及手術后6個月分別取脂肪，分離培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞，檢測細胞增殖能力，并經(jīng)成骨誘導4周

2、后，檢測堿性磷酸酶及鈣離子含量，比較各組間成骨能力的差異。
　　取大鼠骨髓分別以局部高密度和傳統(tǒng)密度進行接種，兩組細胞成骨誘導4周后，行茜素紅染色，堿性磷酸酶及鈣離子定量，并用Q-PCR檢測骨鈣素（OCN）、骨橋蛋白（OPN）及轉(zhuǎn)錄因子（Runx2）的mRNA表達，比較體外成骨能力。用藻酸鈣凝膠混合兩組不同方法培養(yǎng)的細胞，注射于裸鼠皮下，12周后取材，對體內(nèi)成骨情況進行初步研究。
　　結(jié)果：
　　1、ASCs增殖：去勢

3、組中，去勢前所取細胞的增殖速度快于去勢后6個月所取細胞，假手術組中，手術前所取細胞的增殖能力也要強于手術后6個月所取細胞，而去勢組與假手術組6個月后所取的細胞增殖能力相似。
　　2、ASCs成骨能力：去勢組中，去勢前與去勢后6個月所取細胞ALP與鈣離子含量比較，去勢前細胞較高，并有顯著差異（p<0.05），假手術組中，手術前所取細胞的ALP與鈣離子含量較手術后6個月所取細胞高（p<0.05），而去勢組6個月后和假手術組6個月后的細

4、胞ALP和鈣離子含量無顯著差異。
　　3、高密度培養(yǎng)骨髓細胞成骨能力：相同細胞總數(shù)的兩組細胞，經(jīng)成骨誘導，傳統(tǒng)密度培養(yǎng)的細胞鈣離子濃度高于局部高密度培養(yǎng)的細胞（p<0.05），茜素紅染色大體及鏡下得出同樣結(jié)論。
　　4、高密度培養(yǎng)骨髓細胞成骨基因表達：傳統(tǒng)密度培養(yǎng)的細胞骨鈣素（OCN）、骨橋蛋白（OPN）和轉(zhuǎn)錄因子（Runx2）的mRNA表達均高于局部高密度培養(yǎng)的細胞（p<0.05）。
　　5、高密度培養(yǎng)骨髓細胞，在體