Let-7b在皮膚創(chuàng)傷愈合中的功能研究.pdf

1、皮膚是能夠直接與外界環(huán)境接觸的器官，對(duì)人體有著非常重要的作用，并且皮膚表皮及其它的附屬物可作為一個(gè)保護(hù)屏障，阻擋病原物及其異物的侵入，并且能夠防止身體內(nèi)部體液的流失，然而皮膚創(chuàng)傷愈合是一個(gè)復(fù)雜的，多因素參與的過程，由于疾病或者受傷導(dǎo)致皮膚屏障的破壞，有可能引起感染、潰瘍、疤痕形成、甚至發(fā)展為慢性傷口等并發(fā)癥，嚴(yán)重影響著人們的正常生活，了解創(chuàng)傷愈合過程中發(fā)揮作用的各個(gè)因素，對(duì)于指導(dǎo)臨床促進(jìn)創(chuàng)傷愈合，以及創(chuàng)傷的治療有重要的意義。
　　

2、miRNAs是一類長(zhǎng)度為19-24個(gè)核苷酸的非編碼單鏈小分子RNA，在進(jìn)化上具有高度保守性，通常以單拷貝、多拷貝或基因簇等形式存在于基因組中。成熟的miRNA能夠與靶標(biāo)mRNA分子的3'末端非翻譯區(qū)特異性結(jié)合，形成RNA沉默復(fù)合體(RISC)，RISC對(duì)靶標(biāo)基因mRNA產(chǎn)生抑制性信號(hào)，使蛋白表達(dá)受到抑制，或直接導(dǎo)致mRNA的降解，參與轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)調(diào)控，近年來已發(fā)現(xiàn)在創(chuàng)傷愈合的不同階段都有特定的miRNA發(fā)揮重要的作用。
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3、t-7是最先在線蟲中被發(fā)現(xiàn)的一類miRNA，其生物學(xué)功能十分廣泛，在細(xì)胞的遷移與增殖、腫瘤發(fā)生的過程中都發(fā)揮了非常重要的功能。目前l(fā)et-7b只在體外進(jìn)行了一些功能研究，它能夠抑制黑色素瘤細(xì)胞增殖，但是關(guān)于皮膚創(chuàng)傷愈合中發(fā)揮的具體功能尚未見報(bào)道。為了研究let-7b在皮膚創(chuàng)傷愈合中的功能，我們首先在HaCaT細(xì)胞中過表達(dá)了let-7b，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)let-7b能抑制HaCaT細(xì)胞遷移，但不影響細(xì)胞增殖和凋亡過程。為了確定let-7b在體內(nèi)

4、的功能，利用受精卵顯微注射的方法構(gòu)建了在皮膚角質(zhì)細(xì)胞中特異過表達(dá)let-7b的轉(zhuǎn)基因小鼠。通過對(duì)轉(zhuǎn)基因小鼠皮膚創(chuàng)傷愈合過程的觀察和分析，發(fā)現(xiàn)let-7b導(dǎo)致了小鼠皮膚創(chuàng)傷愈合的重上皮化速度減慢。進(jìn)一步研究證實(shí)，let-7b不影響細(xì)胞增殖而是抑制角質(zhì)細(xì)胞的遷移來影響整個(gè)創(chuàng)傷愈合過程。通過生物信息學(xué)的方法預(yù)測(cè)了let-7b的靶分子，挑選與遷移相關(guān)分子進(jìn)行熒光素酶報(bào)告基因活性分析實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)Igf2bp2，Limid，Vangl2是let-7b

5、的靶分子。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)IGF2BP2在小鼠創(chuàng)傷后表達(dá)量上升，尤其在創(chuàng)傷的前緣，提示IGF2BP2在創(chuàng)傷愈合過程中發(fā)揮重要的作用。IGF2BP2能促進(jìn)HaCaT細(xì)胞的遷移，并能激活ERK信號(hào)通路;HaCaT細(xì)胞過表達(dá)let-7b后，IGF2BP2表達(dá)下降，ERK信號(hào)通路明顯受到阻滯。這一結(jié)論也在let-7b轉(zhuǎn)基因小鼠得到了證實(shí)。
　　本研究首次利用體內(nèi)和體外模型系統(tǒng)研究了let-7b在皮膚創(chuàng)傷愈合過程中作用，闡明了let-7b在創(chuàng)