RNA解旋酶p68在創(chuàng)傷愈合中的作用及機制研究.pdf

1、創(chuàng)傷修復(fù)是一個復(fù)雜,但是受到嚴(yán)密調(diào)控的過程。組織損傷后炎性細(xì)胞經(jīng)過破損的毛細(xì)血管遷移至創(chuàng)傷部位,分泌多種細(xì)胞因子,啟動并激活修復(fù)細(xì)胞(包括真皮多能干細(xì)胞,血管內(nèi)皮細(xì)胞和表皮細(xì)胞)增殖、遷移和分化。影響創(chuàng)傷愈合的因素很多,其中修復(fù)細(xì)胞是創(chuàng)傷修復(fù)的關(guān)鍵,細(xì)胞功能受到基因表達(dá)的精確調(diào)控,而細(xì)胞基因表型的變化受到RNA網(wǎng)絡(luò)(包括RNA組和RNA調(diào)控元件)的精密調(diào)控。創(chuàng)傷修復(fù)的核心問題是修復(fù)細(xì)胞的功能調(diào)控。目前對于創(chuàng)傷修復(fù)具體的分子機制還有待于深

2、入研究。
　　 RNA解旋酶p68在進化過程中高度保守,是一個依賴ATP的RNA解旋酶,是細(xì)胞轉(zhuǎn)錄過程中必需的核轉(zhuǎn)錄激活因子,在轉(zhuǎn)錄、翻譯、核糖體生物發(fā)生、RNA傳遞等眾多生物過程中起調(diào)控作用。RNA解旋酶p68在細(xì)胞增殖和器官發(fā)育、成熟過程中發(fā)揮重要作用。RNA解旋酶p68在分裂的細(xì)胞表達(dá)較強,在細(xì)胞中的表達(dá)分布與細(xì)胞周期密切相關(guān)。P68過表達(dá)會導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)惡性轉(zhuǎn)化,而且p68在結(jié)直腸癌、前列腺癌等腫瘤中出現(xiàn)過量表達(dá),且在腫瘤

3、惡轉(zhuǎn)過程中表達(dá)逐漸升高,p68的表達(dá)水平高低與腫瘤的惡變、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。以往有研究揭示在創(chuàng)傷后早期p68在表皮細(xì)胞的表達(dá)下調(diào),但是對其在創(chuàng)傷修復(fù)中的作用尚未完全闡明。
　　 本課題重點研究RNA解旋酶p68在創(chuàng)傷修復(fù)過程中的作用及調(diào)控的分子機制。通過免疫組織化學(xué)技術(shù)比較不同發(fā)育階段的大鼠皮膚、單純切割傷和放創(chuàng)復(fù)合傷創(chuàng)面組織中p68蛋白的表達(dá)特點,同時檢測臨床上患者增生性瘢痕和鱗癌標(biāo)本等異常修復(fù)組織中的表達(dá)開展對照研究,以揭示其在

4、創(chuàng)傷修復(fù)中作用及意義。進一步以三種主要修復(fù)細(xì)胞(真皮多能干細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和表皮細(xì)胞)為對象,研究早期傷口液對其p68表達(dá)的影響;通過RNAi技術(shù)研究p68在三種細(xì)胞增殖和遷移中的作用及其調(diào)控分子的變化特點,得出如下結(jié)果和結(jié)論:
　　 1.p68蛋白在皮膚中的表皮和真皮中均有廣泛表達(dá),其表達(dá)強度隨發(fā)育過程逐漸下降。生后1天呈高表達(dá),隨后生后4天、10天逐漸下降,生后60天以后未檢測到表達(dá),說明p68表達(dá)與發(fā)育過程演進具有相關(guān)性

5、。
　　 2.應(yīng)用大鼠皮膚切割傷和放創(chuàng)復(fù)合傷模型,組化檢測創(chuàng)面組織發(fā)現(xiàn),創(chuàng)傷后,p68表達(dá)激活并上調(diào);放創(chuàng)復(fù)合傷后,傷口愈合延遲,p68表達(dá)出現(xiàn)延遲,提示p68在難愈創(chuàng)傷修復(fù)啟動延遲發(fā)揮作用。
　　 3.發(fā)現(xiàn)p68蛋白在增生性瘢痕和鱗癌標(biāo)本中呈現(xiàn)異常高表達(dá),且表達(dá)水平與鱗癌轉(zhuǎn)移相關(guān),首次提出p68異常表達(dá)在鱗癌發(fā)生發(fā)展中的潛在臨床意義。
　　 4.通過體外實驗發(fā)現(xiàn)p68的表達(dá)水平與細(xì)胞所處的增殖狀態(tài)相關(guān),增殖旺盛