清熱化瘀顆粒預處理對腦缺血大鼠CHOP、Gadd34蛋白表達的影響.pdf

1、目的：觀察清熱化瘀顆粒對局灶性腦缺血大鼠腦內(nèi) CHOP、Gadd34蛋白的影響，探討清熱化瘀顆粒預處理對局灶性腦缺血大鼠的神經(jīng)元保護作用。
　　方法：將80只大鼠隨機分為四組，即假手術組（sham-operation，SO）；MCAO組：假手術+腦缺血組（SO+MCAO）；BIP組：預缺血+腦缺血組(BIP+MCAO）。QRHY組：預缺血+清熱化瘀顆粒+腦缺血組（BIP+QRHY+MCAO）；每組20只。每組按照再缺血后12h、1

2、d、2d、3d四個時間點平均分為4個亞組（n=5）。采用大鼠大腦中動脈二次線栓法制備大鼠腦缺血預處理模型，分別作如下處理：假手術組（SO組）：以假手術代替預缺血及缺血再灌注，線栓只插入頸內(nèi)動脈9mm，然后正常飼養(yǎng)，自由飲水；MCAO組：以假手術代替預缺血，其余步驟同腦缺血預處理組，動物造模后正常飼養(yǎng)，自由飲水，灌胃等體積的生理鹽水；BIP組：MCAO10min后抽出栓線，完成預缺血；3d后再次行MCAO2h，灌胃等量生理鹽水，再灌注后1

3、2h、1d、2d、3d處死；QRHY組：缺血預處理10min后，在大鼠麻醉清醒后1h灌胃清熱化瘀顆粒溶液，按每次1.4m1/100g給藥，其濃度及等效劑量按體表面積折算，連續(xù)3d，每天上、下午各一次。3d后給予2hMCAO，再灌注后12h、1d、2d、3d處死；造模后取材，常規(guī)HE染色并在光學顯微鏡下觀察各組腦組織病理形態(tài)學改變，應用免疫組織化學方法檢測CHOP、Gadd34蛋白在大鼠梗死灶表達的變化。
　　結(jié)果：各組均可見CHO

4、P、Gadd34蛋白表達，主要在梗死區(qū)周圍皮層，陽性表達為細胞胞漿呈棕黃色，多數(shù)陽性細胞發(fā)生形態(tài)學改變，胞核皺縮，呈梭形或條索狀。圖像分析結(jié)果顯示：假手術組大鼠大腦頂葉皮層有少量CHOP、Gadd34蛋白陽性細胞表達。MCAO組大鼠腦缺血再灌注后CHOP、Gadd34蛋白表達平均灰度值明顯下降，表明其蛋白陽性數(shù)明顯增多(P<0.01)。
　　對于CHOP蛋白，再灌注1d其平均灰度值降至最低，表明其陽性細胞表達達高峰(P<0.01)

5、，至再灌注2d其蛋白表達平均灰度值仍高。BIP組能明顯升高大鼠缺血再灌注損傷后 CHOP蛋白表達平均灰度值水平，即能降低陽性細胞表達數(shù)，與MCAO組比較，BIP組大鼠12h至1d CHOP蛋白表達平均灰度值明顯上升(P<0.01)。清熱化瘀顆粒預處理組表達較單純?nèi)毖俟嘧⒔M低(P<0.01)，與BIP組比較，大鼠1d CHOP蛋白表達平均灰度值明顯上升(P<0.05)，且與腦組織病理形態(tài)學改變相一致。說明清熱化瘀顆粒預處理能夠抑制梗死后

6、CHOP表達。
　　對于Gadd34蛋白，再灌注12h其平均灰度值降至最低，表明其陽性細胞表達達高峰(P<0.01)，至再灌注1d其蛋白表達平均灰度值開始升高。BIP組及QRHY組與MCAO組比較，1d至2d Gadd34蛋白表達平均灰度值明顯下降(P<0.01)，且兩組再灌注1d其平均灰度值降至最低，表明其陽性細胞表達達高峰(P<0.01)，1d至2d均能持續(xù)性表達(P<0.01)，至3d時蛋白表達平均灰度值開始升高(P<0.0