N-乙酰氨基葡萄糖對5-FU所致大鼠腸粘膜屏障損傷的保護(hù)及機(jī)制初探.pdf

1、目的：
　　 本研究旨在探索腸粘膜屏障的保護(hù)方法。腸粘膜屏障是機(jī)體內(nèi)外聯(lián)系的重要界面，包括化療在內(nèi)的多種應(yīng)激因素可致腸粘膜屏障損壞?；熕幬镌跉缒[瘤細(xì)胞的同時，對消化道粘膜上皮組織細(xì)胞產(chǎn)生毒性。導(dǎo)致腸粘膜萎縮、絨毛變短腸通透性增加、腸局部免疫功能受損以及腸菌群失調(diào)等?；煂δc粘膜屏障的這些損傷可導(dǎo)致患者惡心、嘔吐、腹瀉，嚴(yán)重則會出現(xiàn)粘膜壞死、脫落、便血及全身不良反應(yīng)，甚至導(dǎo)致病情惡化，危及生命。因此，在化療時保護(hù)腸粘膜屏障結(jié)構(gòu)

2、完整和功能正常是防治化療不良反應(yīng)的重要課題。
　　 氨基葡萄糖(glucosamine，GlcN)是在2位碳上氨基取代的葡萄糖，N-乙酰氨基葡萄糖(N-Acetyl-D-glucosamine，GlcNAc)則是GlcN的氨基上發(fā)生乙?；难苌铮肿恿啃?，水溶性好，具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)作用；能有效改善腸粘膜局部生態(tài)環(huán)境、提高上皮細(xì)胞活性、能進(jìn)入細(xì)胞發(fā)揮蛋白的糖基化修飾等作用，為此，本研究觀察GlcNAc對5-FU引起的腸粘膜結(jié)

3、構(gòu)與功能損傷的保護(hù)作用，并探索其作用機(jī)理，為化療期間腸粘膜屏障受損新的防治方法研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 材料與方法：
　　 1.動物的分組與模型建立：SPF級SD雄性大鼠50只，體重190～210g，隨機(jī)分為空白對照組、5-FU模型組、Gln組、GlcN組和GlcNAc組(n=10)。采用5-FU腹腔注射方法制備大鼠腸粘膜屏障損傷模型，按分組分別給藥，連續(xù)6d；
　　 2.實(shí)驗(yàn)過程中，密切檢測大鼠的體重變化；所有

4、實(shí)驗(yàn)動物每天稱量體重，并以此為依據(jù)調(diào)整給藥劑量；
　　 3.采用HE染色法，光鏡下觀察大鼠小腸粘膜組織病理形態(tài)學(xué)改變；通過透射電鏡，觀察小腸粘膜上皮細(xì)胞和細(xì)胞連接超微結(jié)構(gòu)改變；
　　 4.采用分光光度法檢測大鼠血漿中D-乳酸的含量；采用ELISA法檢測大鼠血漿中DAO的含量；
　　 5.Western blot法檢測大鼠小腸組織中O-GlcNAc蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.GlcNAc對

5、大鼠體重變化的影響及解剖時大鼠小腸外觀觀察：
　　 與實(shí)驗(yàn)前相比，空白對照組、Gln組和GlcNAc組大鼠體重增加，而5-FU模型組和GlcN組大鼠體重減輕。解剖可見，空白對照組和GlcNAc組大鼠小腸無明顯變化，5-FU組、GlcN和Gln組不同程度存在腸脹氣、腸粘膜充血以及腹瀉。
　　 2.GlcNAc對大鼠小腸組織病理形態(tài)學(xué)改變的影響：
　　 HE染色高倍鏡觀察顯示：空白對照組大鼠小腸腸壁結(jié)構(gòu)清晰完整，粘膜

6、絨毛較細(xì)長，發(fā)達(dá)，排列規(guī)則緊密；5-FU模型組和GlcN組損傷明顯；GlcNAc組和Gln組大鼠小腸粘膜有輕度損傷表現(xiàn)。
　　 3.GlcNAc對大鼠小腸組織超微結(jié)構(gòu)變化的影響
　　 透射電鏡觀察顯示：5-FU細(xì)胞連接結(jié)構(gòu)局部出現(xiàn)異常；GlcNAc組大鼠小腸上皮細(xì)胞緊密連接結(jié)構(gòu)與空白對照組相似。
　　 4.GlcNAc對大鼠血漿中D-乳酸含量的影響
　　 GlcNAc組大鼠D-乳酸的含量較5-FU模型組和

7、GlcN組顯著降低(p<0.01)，分別降低了31.5％和33.7％。而GlcN組與5-FU模型組相比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)。
　　 5.GlcNAc對大鼠血漿中DAO含量的影響
　　 與模型組和GlcN組相比較，Gln組和GlcNAc組大鼠DAO的含量明顯降低(p<0.01)；而GlcN組與5-FU模型組相比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)。
　　 6.GlcNAc對大鼠小腸組織中O-GlcNAc蛋白

8、表達(dá)的影響
　　 與空白對照組相比，5-FU模型組和GlcN組大鼠小腸組織中O-GlcNAc蛋白水平明顯降低(p<0.01)；與模型組和GlcN組相比較，Gln組和GlcNAc組大鼠O-GlcNAc蛋白水平明顯增高(p<0.01)；而GlcN組與5-FU模型組相比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.N-乙酰氨基葡萄糖能減輕化療所致大鼠腸粘膜損傷，降低腸粘膜通透性，保護(hù)小腸粘膜及其屏障功能；