N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酸試劑盒制備及其臨床應(yīng)用研究.pdf

1、本文對(duì)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酸試劑盒制備及其臨床應(yīng)用進(jìn)行了研究。本研究分為兩個(gè)部分：
　　 第一部分：NAG試劑盒制備。
　　 目的：制備符合臨床檢測(cè)要求的NAG測(cè)定液體試劑盒。
　　 方法：采用VRA-NAG為底物,選擇合適的緩沖液體系、底物濃度及表面活性劑,制備N(xiāo)AG測(cè)定液體試劑盒,并對(duì)其線(xiàn)性、精密度、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性和抗干擾性等性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　 結(jié)果：NAG活性在100 mmol／L檸檬酸

2、緩沖液pH5.8時(shí)最大,pH在5.0-6.6之間相差不大,考慮到底物穩(wěn)定性,選用緩沖液pH5.0作為NAG測(cè)定最佳值。根據(jù)米氏方程測(cè)得Km值為0.32 mmol／L,因此,將NAG測(cè)定的底物濃度定為Km值的10倍量3.2 mmol／L作為NAG測(cè)定試劑的最佳底物濃度。底物溶液中添加0.1％的Tween20和0.1％的BSA,有助于底物溶解及穩(wěn)定。NAG活性在0-360 U／L范圍內(nèi)線(xiàn)性良好。批內(nèi)CV低值標(biāo)本為1.74％,高值標(biāo)本為0.8

3、6％；批間CV低值標(biāo)本為3.21％,中值標(biāo)本為1.65％,高值標(biāo)本為1.08％。平均回收率為103.7％。試劑開(kāi)瓶7天和保存一年,穩(wěn)定性均較好。維生素C濃度在50 mg／L以下對(duì)本法測(cè)定結(jié)果基本無(wú)干擾,高濃度將產(chǎn)生負(fù)干擾,使測(cè)定結(jié)果偏低。乳酸<0.9 g／L、丙酮酸<20 mg／L、酒石酸<17 mg／L、尿酸<0.13 g／L、葡萄糖<9 g／L、膽紅素<4.6 mg／L時(shí),對(duì)本法測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著影響。
　　 結(jié)論：本研究研制的

4、NAG測(cè)定試劑盒可靈敏、準(zhǔn)確、快速地對(duì)人尿液中的NAG活性進(jìn)行測(cè)定,試劑盒經(jīng)線(xiàn)性、精密度、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性和抗干擾性的相關(guān)比較檢測(cè),結(jié)果符合臨床檢測(cè)要求。
　　 第二部分：NAG試劑盒在糖尿病腎病診斷中的臨床應(yīng)用。
　　 目的：探討尿NAG對(duì)糖尿病早期腎損害的診斷價(jià)值。
　　 方法：檢測(cè)糖尿病無(wú)腎病組、糖尿病合并腎病組及正常對(duì)照組尿NAG活性。
　　 結(jié)果：糖尿病無(wú)腎病組NAG值為20.5±16.6 U／L

5、,糖尿病有腎病組NAG值為40.6±13.4 U／L,均較對(duì)照組7.2±2.8 U／L明顯升高(P<0.05),糖尿病有腎病組較糖尿病無(wú)腎病組尿NAG值明顯升高(P<0.05)。
　　 結(jié)論：尿NAG檢測(cè)對(duì)糖尿病腎損害的早期診斷具有一定的價(jià)值。
　　 本研究表明：⑴研制的NAG測(cè)定試劑金可靈敏、準(zhǔn)確、快速地對(duì)人尿液中的NAG活性進(jìn)行測(cè)定。⑵制備的NAG測(cè)定試劑盒,經(jīng)線(xiàn)性、精密度、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性和抗干擾性的相關(guān)比較檢測(cè),結(jié)