SM-164聯(lián)合多柔比星(ADM)對人骨肉瘤U-2細胞增殖及凋亡的影響.pdf

1、背景及目的：
　　Smac作為一種新型線粒體蛋白質(zhì)，自從2000年7月由Du等首次報道以來作為一種新型抗癌藥物得以被廣泛研究，SM-164作為Smac蛋白的一種亞型，其抗癌效果更為顯著，同時，有多篇報導(dǎo)顯示，在體內(nèi)外試驗中，SM-164對人類多種類型腫瘤細胞有明確的抗腫瘤活性，包括前列腺癌，結(jié)腸癌，乳腺癌，卵巢癌以及惡性黑色素瘤等。本文旨在探究 SM-164單藥以及聯(lián)合鹽酸鹽多柔比星（ADM）對骨肉瘤U-2-OS的增值抑制和凋亡的

2、作用，為進一步探討其作用機制和可能的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，以及SM-164作為一種新型化療生物制劑用于人骨肉瘤（OS）治療的可能性。
　　方法：
　?。?）MTT法檢測SM-164單藥及聯(lián)合鹽酸多柔比星（ADM）對U-2-OS細胞的增殖抑制作用。1)檢測不同濃度梯度的SM-164分別單獨處理U-2-OS細胞24小時后，U-2-OS的增殖抑制作用，并繪制生長曲線；2)根據(jù)前期濃度梯度實驗，SM-164作用濃度分別設(shè)定為100nM、20

3、0nM，而ADM的作用濃度則分別設(shè)定為臨床用藥濃度0.5μg/mL和臨床半量濃度0.25μg/mL，分九組：單藥SM164-100nM組、SM164-200nM組、單藥ADM0.25μg/mL組、ADM0.5μg/mL組、聯(lián)合用藥（SM164-100nM+ADM0.25μg/mL）組、聯(lián)合用藥（SM164-100nM+ADM0.5μg/mL）組、聯(lián)合用藥（SM164-200nM+ADM0.25μg/mL）組以及聯(lián)合用藥（SM164-20

4、0nM+ADM0.25μg/mL）組和對照組。
　?。?）Hoechst染色檢測U-2細胞凋亡。分別設(shè)置對照組、實驗組1（ADM0.25/0.5μg/ml）、實驗組2（ADM0.25/0.5μg/ml+SM164-100nM）。
　　（3）流式細胞儀檢測ADM（0.25μg/mL、0.5μg/mL）聯(lián)合SM-164（100nM）誘導(dǎo)U-2細胞凋亡。
　　結(jié)果：
　?。?）MTT實驗顯示：1）當不同濃度梯度（1nM

5、、10nM、50nmo l/L、100nM、200nM、500nM、1μmol/L）的SM-164分別單獨處理U-2-OS細胞24小時后，U-2-OS的增殖受到抑制，并隨著SM-164劑量的增加抑制程度逐漸增強，但抑制效果并不顯著，對U-2細胞存活率沒有顯著的改變（詳見表1，圖1）；2）SM-164（100nM/200nM）聯(lián)合ADM（0.25/0.5μg/mL）比單獨使用相同濃度的ADM對U-2-O S抑制率均明顯加強，兩者均表現(xiàn)明顯

6、協(xié)同效應(yīng)（詳見表2，圖2）。
　?。?）Hoec hst染色顯示：對照組（不加藥），其視野內(nèi)U-2細胞與加藥組相比數(shù)量雖然較多，但只有很微弱的藍色熒光；ADM（0.25/0.5μg/mL）組視野內(nèi)細胞數(shù)量有所減少，可見少量藍色熒光；ADM（0.25/0.5μg/mL）+SM-164（100nM）組視野內(nèi) U-2細胞致密濃染，清晰可見大量且較強藍色熒光，提示該組藥物促U-2-OS凋亡效果顯著。
　?。?）流式細胞儀檢測顯示：單

7、獨用ADM（0.25μg/mL、0.5μg/mL）處理U-2細胞24小時，其凋亡率為（8.53±2.41）％、（12.2±3.11）%；SM-164-100nM處理U-2細胞24小時后，其凋亡率為（6.03±2.01）%；將SM-164-100nM聯(lián)合鹽酸多柔比星ADM（0.25μg/mL、0.5μg/mL）處理U-2–OS24小時，其凋亡率分別為（36.4±3.68）%、（50.2±5.19）%，SM-164可促進U-2細胞凋亡。