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1、目的:本研究擬觀察在載脂蛋白E基因敲除(ApoE—/—)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型中,小鼠血脂、OX40、OX40配體(OX40L)及活化T細(xì)胞核因子Cl(NFATcl)表達(dá)水平的變化,探討OX40—OX40L相互作用對(duì)其淋巴細(xì)胞中活化T細(xì)胞核因子Cl表達(dá)的影響及相關(guān)作用機(jī)制。
方法:
(1)采用ApoE—/—基因敲除鼠頸動(dòng)脈硅膠圈植入法快速制作動(dòng)脈粥樣斑塊模型,蘇木精—伊紅(HE)染色,用于病理形態(tài)學(xué)分析。免疫組
2、化檢測(cè)頸動(dòng)脈粥樣斑塊中NFATcl表達(dá),小鼠淋巴細(xì)胞NFATcl、OX40、OX40L mRNA和蛋白表達(dá)分別應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)。
(2)取模型鼠淋巴細(xì)胞,以不同濃度刺激型OX40抗體上調(diào)OX40—OX40L相互作用,另以不同濃度抑制型OX40L抗體下調(diào)OX40—OX40L相互作用,不同時(shí)間點(diǎn)收獲細(xì)胞,以實(shí)時(shí)熒光定量PCR、流式細(xì)胞技術(shù)和Western Blot檢測(cè)NFATcl表達(dá)水平。
3、 結(jié)果:
(1)與正常對(duì)照組比較,手術(shù)組血清TC、TG、LDL—C明顯升高,HDL—C則明顯降低。
(2)正常對(duì)照組頸動(dòng)脈內(nèi)膜光滑平整,管壁呈半透明狀;無脂紋和斑塊形成,彈力板完整。手術(shù)組ApoE—/—?jiǎng)用}粥樣斑塊模型小鼠有明顯斑塊形成,含大量泡沫細(xì)胞,富含脂質(zhì),可見膽固醇結(jié)晶,彈力板變性、斷裂。
(3)手術(shù)組ApoE—/—小鼠頸動(dòng)脈AS斑塊中NFATcl顯著表達(dá),正常對(duì)照組NFATcl頸動(dòng)脈中
4、不表達(dá)。
(4)手術(shù)組ApoE—/—AS斑塊模型小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中NFATcl、OX40、OX40LmRNA和蛋白表達(dá)均明顯高于正常對(duì)照組,ApoE—/—小鼠NFATcl與OX40、OX40L表達(dá)成正相關(guān)。
(5)anti—OX40特異性刺激OX40—OX40L軸后,小鼠淋巴細(xì)胞NFATcl mRNA及蛋白表達(dá)明顯上調(diào),anti—OX40(20μg/ml)時(shí)刺激作用最強(qiáng),刺激時(shí)間24h最佳。
(
5、6)anti—OX40L特異性阻斷OX40—OX40L軸能明顯抑制NFATcl mRNA及蛋白表達(dá),anti—OX40L(20μg/ml)時(shí)抑制作用最強(qiáng),抑制時(shí)間24h最佳。
結(jié)論:
(1)NFATcl與OX40—OX40L在動(dòng)脈粥樣硬化的形成、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。
(2)OX40—OX40L相互作用能調(diào)控ApoE—/—小鼠淋巴細(xì)胞NFATcl表達(dá),NFATcl是受OX40—OX40L調(diào)控的影
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