協(xié)同刺激分子OX40L在2型糖尿病合并大血管病變中的作用及意義.pdf

1、隨著人民生活水平的提高，生活方式西方化及人口老齡化，人類健康面臨的慢性疾病威脅正日益加重，其中糖尿病及其慢性并發(fā)癥更是危害健康的無情殺手。近年來研究認為，2型糖尿?。═2DM）是一種免疫相關(guān)性慢性炎癥性疾病，機體免疫調(diào)節(jié)異?？赡茉赥2DM及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。協(xié)調(diào)刺激分子OX40L是腫瘤壞死因子超家族（TNFSF）成員，與其特異性受體OX40相結(jié)合，式為T、B細胞的長效激活提供第二信號[1]，發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)作

2、用。
　　本課題通過流細胞技術(shù)以及 ELISA法檢測單純糖尿病患者、糖尿病合并頸動脈斑塊患者和糖尿病合并急性心肌梗死患者外周血中單核細胞表面OX40L和可溶性O(shè)X40L（sOX40L）的水平變化，分析膜型和可溶性O(shè)X40L在糖尿病大血管病變發(fā)生發(fā)展中的生物學作用。
　　一、O X40/O X40 L信號通路在2型糖尿病合并大血管病變中的表達及意義
　　目的:探討2型糖尿病及其合并大血管病變患者外周血免疫細胞表面OX40

3、/OX40L和血清中可溶性O(shè)X40L(sOX40L)的表達變化。
　　方法:采用免疫熒光標記流式細胞技術(shù)檢測A組（單純2型糖尿病組，42例）、B組（2型糖尿病合并頸動脈斑塊組，31例）、C組（2型糖尿病合并急性心肌梗死組，25例）、D組（健康對照組，33例）人群外周血免疫細胞膜表面OX40和OX40L的表達水平，ELISA法檢測四組血清sOX40L的濃度。
　　結(jié)果:四組人群中，外周血CD4+、CD8+ T淋巴細胞表面OX4

4、0的表達差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與D組比較，A、B、C三組CD14+單核細胞表面OX40L的表達均上調(diào)(P<0.01)；C組 CD14+單核細胞表面 OX40L表達水平高于 A組、B組（P<0.01、P<0.05）。與D組相比，A、B、C組患者血清sOX40L的水平明顯升高(P<0.01)，C組患者血清sOX40L的表達水平高于A組、B組（P<0.01、P<0.05）。
　　結(jié)論:2型糖尿病患者外周血單核細胞表面及血清

5、中上調(diào)表達OX40L，其表達水平與糖尿病大血管病變嚴重程度密切相關(guān)。
　　二、高糖對單核細胞表面OX40L以及可溶性O(shè)X40L表達的影響及生物學意義
　　目的:探討高糖對單核細胞表面OX40L分子表達和培養(yǎng)上清中可溶性O(shè)X40L產(chǎn)生的影響，觀察高糖對單核細胞生物學作用的影響。
　　方法:(1)收取健康人外周血，淋巴細胞分離液（Ficoll）分離出外周血單個核細胞（PBMCs），貼壁1~2h后，移除懸浮細胞，收集貼壁細胞

6、即為CD14+單核細胞（純度可達90％左右）；(2)實驗分組均以不同濃度葡萄糖(5.5、11、22、33mmol/L)加入培養(yǎng)基中干預(yù)CD14+單核細胞，分別于12h、24h、36h、48h收細胞和培養(yǎng)上清；(3)應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測CD14+單核細胞表面OX40L的表達；(4)應(yīng)用ELISA試劑盒檢測細胞培養(yǎng)上清中sOX40L和TNF-α的含量。
　　結(jié)果:
　　(1)流式結(jié)果顯示：高糖濃度組單核細胞表面OX40L表達較對照