中藥單體蘆薈大黃素治療非酒精性脂肪性肝炎的作用機(jī)制.pdf

1、研究目的：
　　研究中藥單體蘆薈大黃素(aloe emodin，AE)治療非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholicsteatohepatitis，NASH)的作用機(jī)制，為AE治療NASH的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　研究方法：
　　1.1小鼠NASH造模分組:昆明小鼠66只，正常喂養(yǎng)一周，在活動(dòng)、進(jìn)食、糞便均無異常的情況下隨機(jī)分為兩組:小鼠NASH模型組（56只）和正常對照組（10只）。NASH模型組予以低蛋白高

2、脂飼料喂養(yǎng)8周。正常對照組給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)。
　　1.2 AE對小鼠NASH的治療分組:8周后，隨機(jī)從造模組取出6只，驗(yàn)證造模成功。將NASH造模組的小鼠按體重層次隨機(jī)分為5組，每組10只。(1) AE低劑量組（20mg·kg-1·d-1）;(2) AE中劑量組（40mg·kg-1·d-1）;(3) AE高劑量組(80mg·kg-1·d-1);(4)茴三硫陽性對照組(15.626mg·kg-1·d-1);(5) NASH模型組。(

3、1)(2)(3)(4)組予以生理鹽水+相應(yīng)藥物灌胃，1次/天，連續(xù)4周:(5)予以生理鹽水20 ml·kg-1·d-1灌胃，連續(xù)四周。(1)(2)(3)(4)(5)均予以高脂飼料喂養(yǎng)，自由飲水。
　　1.3實(shí)驗(yàn)處理方法及指標(biāo)測定:(1):實(shí)驗(yàn)期間觀察小鼠的一般情況;(2):實(shí)驗(yàn)結(jié)束前一天從晚上8點(diǎn)開始禁食;(3)禁食12小時(shí)后，摘眼球取血，3000rpm/min，離心5分鐘，取上清液，0-4℃保存，檢測血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanin

4、e aminotransferase，ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase，AST)、甘油三酯(triglyceride，TG)，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、壞死因子-α(tumor necrosis factor，TNF-α)、內(nèi)毒素(endotoxin，ET)等含量。(4)取小鼠肝臟同一部位，HE染色后光鏡

5、下觀察肝組織病理情況。
　　研究結(jié)果：
　　(1)一般情況:在整個(gè)造模過程中各組小鼠均未發(fā)生意外性死亡。正常對照組小鼠:進(jìn)食、飲水、大小便正常，毛發(fā)密且有光澤，體重增長較快;NASH模型組小鼠:一般情況較好，體重快速增加，6周后小鼠食欲減退，但體重仍有小幅度增加，8周后，體重較正常對照組明顯增加((P＜0.05)，但精神狀態(tài)較差，毛發(fā)光澤減弱，活動(dòng)減少。
　　(2)小鼠血清生化指標(biāo)ALT、AST、TG的測定:與正常對照

6、相比，NASH模型組小鼠血清AST、ALT、TG水平明顯升高(P＜0.01);與NASH模型組相比，AE各治療組及茴三硫組NASH小鼠血清AST、ALT水平、TG含量顯著降低(P＜0.01)，其中AE高劑量組療效最明顯(P＜0.01)，且與茴三硫組作用程度相當(dāng)(P＞0.05)。
　　(3)小鼠血清SOD活性及MDA含量的測定:與正常對照組相比，NASH模型組小鼠血清SOD活性明顯降低，MDA水平明顯升高(P＜0.01);與NASH

7、模型組相比，AE各治療組及茴三硫組可明顯增強(qiáng)NASH小鼠血清SOD活性，降低MDA含量(P＜0.01)，隨著AE劑量的增加，療效也越明顯，高劑量組作用與茴三硫療效相當(dāng)(P＞0.05)。
　　(4)小鼠血清TNF-α、ET的測定:與正常對照組相比，NASH模型組小鼠血清TNF-a，ET顯著增高(P＜0.01);各治療組與NASH模型組相比，NASH小鼠血清TNF-a，ET不同程度的下降(P＜0.01)，AE低、中、高劑量組之間比較，

8、高、中劑量組療效優(yōu)于低劑量組(P＜0.01)，且AE高劑量組、中劑量組與茴三硫組療效相當(dāng)(P＞0.05)。
　　(5) HE染色結(jié)果:正常對照組:肝組織結(jié)構(gòu)正常，肝小葉清晰，肝細(xì)胞圍繞中央靜脈呈放射狀排列。肝細(xì)胞細(xì)胞核圓，胞漿豐富，無炎細(xì)胞浸潤。NASH模型組:超過70％的肝細(xì)胞發(fā)生脂肪變性，變性細(xì)胞胞漿內(nèi)充滿大小不一的球形脂滴空泡，主要為大泡變性，大者可充滿整個(gè)細(xì)胞而將細(xì)胞核擠至一側(cè)，也有部分為小泡性脂肪變性，90％以上的肝細(xì)胞

9、伴有炎癥細(xì)胞浸潤，以小葉內(nèi)炎癥為主，無壞死、纖維化。AE低劑量組:超過60％的肝細(xì)胞發(fā)生大泡脂肪變性，較大者的圓形脂滴可將細(xì)胞核擠都一邊，細(xì)胞胞漿內(nèi)的脂滴數(shù)量稍減少，但仍有炎癥細(xì)胞浸潤，無壞死、纖維化等。AE中劑量組:約35％-50％的肝細(xì)胞發(fā)生大泡脂肪變性，部分小泡性脂肪變，脂滴占細(xì)胞胞漿體積近一半，部分細(xì)胞無炎癥細(xì)胞浸潤。AE高劑量組:約25％的肝細(xì)胞內(nèi)小泡性脂肪變，脂滴體積小，數(shù)量少，以小葉中央部脂變較明顯。茴三硫組:約20％-2