大白菜推定AP2-ERF轉(zhuǎn)錄因子cDNA的分離及表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、AP2族轉(zhuǎn)錄因子在植物適應(yīng)逆境的過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用并具有明顯的功能多樣性。為了開展AP2族轉(zhuǎn)錄因子在大白菜高溫脅迫中的功能分析,本研究利用高溫誘導(dǎo)處理的大白菜葉片所構(gòu)建的cDNA文庫,在優(yōu)化cDNA文庫篩選方法的基礎(chǔ)上,篩選出一個(gè)推定AP2／ERF轉(zhuǎn)錄因子的全長cDNA,并利用Gateway技術(shù)構(gòu)建入門載體和表達(dá)載體,主要結(jié)果如下:
　　 1、采用基于PCR技術(shù)的96孔板cDNA文庫篩選法,利用大白菜與AP2／ERF蛋白同

2、源的EST進(jìn)行拼接并設(shè)計(jì)的引物,篩選cDNA文庫獲得了一個(gè)推定AP2／ERF轉(zhuǎn)錄因子的陽性cDNA克隆。測序結(jié)果表明,該cDNA陽性克隆長度為812bp,含有一個(gè)172個(gè)氨基酸的開放讀碼框架,與擬南芥等其它植物的AP2族蛋白有較高的同源性,推測它可能與大白菜適應(yīng)熱脅迫有關(guān)。
　　 2、利用Gateway大規(guī)模克隆技術(shù)分別構(gòu)建了上述大白菜推定AP2／ERF轉(zhuǎn)錄因子入門載體和表達(dá)載體,該載體可應(yīng)用于農(nóng)桿菌的雙子葉植物轉(zhuǎn)化,為該基因功