PI3K-AKT通路與大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后基底動脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過改良方法建立大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血?jiǎng)游锬Ｐ?，對?shí)驗(yàn)大鼠基底動脈內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢測及病理檢查，探討PI3K-AKT通路在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后基底動脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的意義。
　　 方法：采用改良枕大池二次注血法建立蛛網(wǎng)膜下腔出血模型，給藥方法為腦室內(nèi)給藥。84只清潔級SD大鼠隨機(jī)分為A組（對照組）、B組（SAH組）、C組（SAH+PI3K-AKT通路激動劑IGF-1組），每組按SAH后1d、3d、7d、11d時(shí)間點(diǎn)分成4個(gè)

2、亞組(n=7)，相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)甲醛灌注取腦后透射電子顯微鏡觀察并原位末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)檢測三組大鼠基底動脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡;Western blot方法測定不同時(shí)間點(diǎn)基底動脈P-AKT、caspase-3表達(dá)水平。
　　 結(jié)果1.透射電子顯微鏡觀察:與對照組（A組）比較，SAH后第3、7天B組、C組內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)凋亡樣變化，血管內(nèi)皮細(xì)胞膜起泡，胞質(zhì)凝聚，胞漿空泡變，核染色質(zhì)凝聚、趨邊，以B組更顯著。到SAH后第11天B、C組上述情

3、況減輕，以C組更顯著。2.TUNEL檢測:B、C兩組組在SAH后3、7天均出現(xiàn)細(xì)胞凋亡，以B組更顯著;而到SAH后11天B、C組凋亡程度有所緩解，以C組更顯著。3.Westernblot檢測P-AKT和caspase-3的蛋白表達(dá)，與內(nèi)參β-actin比較測灰度值。結(jié)果顯示:(1) SAH后第3、7天C組P-AKT的表達(dá)顯著高于A組，而B組P-AKT的表達(dá)與A組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，B、C兩組caspase-3的表達(dá)均高于A組，以B組更

4、顯著;(2)而到SAH后11天C組caspase-3的表達(dá)與3、7天比較明顯降低;而B組P-AKT表達(dá)增加，與A組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，caspase-3的表達(dá)則有所下降。
　　 結(jié)論1.蛛網(wǎng)膜下腔出血后基底動脈內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)凋亡樣變化;2.基因AKT與caspase-3在SAH后基底動脈中均有表達(dá)，在不同時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量有差異，并呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。3.PI3K-AKT通路可能參與了SAH后基底動脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的過程，P-AKT表達(dá)增加可