豬胰高血糖素樣肽-2-PLGA微球的制備及其對小鼠、斷奶仔豬腸道損傷修復效果的研究.pdf

1、豬胰高血糖素樣肽-2(pGLP-2)能夠特異性地促進腸黏膜生長，加速損傷修復，為治療“仔豬斷奶綜合癥”提供了新的途徑，但pGLP-2易被二肽酰肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)快速降解，嚴重制約了其應用，亟需研發(fā)延長其半衰期的技術(shù)。本文采用聚乳酸羥基乙酸聚合物(PLGA)包被pGLP-2制成PLGA/pGLP-2微球載藥系統(tǒng)，延長了pGLP-2在體內(nèi)的釋放時間，并在小鼠及仔豬試驗中取得了較好的腸道修復效果。
　　試驗一:pGLP-2/PLGA微

2、球的制備
　　本試驗探究了復乳法（W/O/W）及水包油包固體法（S/O/W）制備出微球的區(qū)別;優(yōu)化了S/O/W法制備微球的工藝;研究了在外水相加入NaCl及油相添加聚乙二醇(PEG)對微球內(nèi)藥物釋放的影響。結(jié)果表明:(1)S/O/W法較W/O/W法制備的微球載藥量相近，但粒徑較均一，突釋低，且表面圓整光滑，無較大微孔。(2)使用S/O/W法制備微球，優(yōu)選出了理論載藥量為1％、轉(zhuǎn)速為2000 rpm、PVA濃度為2％、PLGA濃度為

3、100 mg/mL、DCM/DMSO體積比為40作為制備工藝，制備出包封率為72％、突釋率為16.62％、粒徑為37.5μm的微球。(3)在油相添加10％PEG會增加微球表面孔徑及微球粒徑，加速藥物的釋放，突釋較高。外水相添加5％NaCl能降低微球粒徑及突釋，但對藥物釋放無明顯改變，在外水相中添加5％NaCl的同時在油相中添加10％PEG能在加速藥物釋放的同時不顯著提高突釋。
　　小結(jié):采用S/O/W法優(yōu)化工藝后制備出的微球包封率

4、為72％、突釋率為16.62％、粒徑為37.5μm，添加NaCl和PEG能加速微球的藥物釋放，使其在體外穩(wěn)定釋放9天以上。
　　試驗二:pGLP-2/PLGA微球?qū)SS誘導結(jié)腸炎小鼠損傷修復的研究
　　本試驗選取30只雄性BALB/C小鼠按體重隨機分為對照組、葡聚糖硫酸鈉組（DSS組）、微球組。對照組每日飲用蒸餾水，第一天腹腔注射300μL生理鹽水;DSS組每日飲用4％DSS，第一天腹腔注射300μL生理鹽水;微球組每日飲

5、用4％DSS，第一天腹腔注射300μL含10 mg微球的生理鹽水。試驗第10天小鼠稱重后屠宰，采血，分離血清，測定測量小腸及結(jié)腸長度、稱重;取2份十二指腸、結(jié)腸樣品，1份中性甲醛固定，進行常規(guī)石蠟切片，HE染色;另1份提取RNA，進行RT-PCR。結(jié)果表明:(1) DSS組較對照組小鼠體重、結(jié)腸長度、十二指腸絨毛高度及絨毛隱窩比顯著降低;注射一次pGLP-2微球能顯著抑制DSS引起的體重降低、結(jié)腸長度變短，且小鼠小腸重量較對照組和DSS

6、組顯著提高，結(jié)腸重量較對照組顯著提高。(2)飲用DSS能顯著增加小鼠體內(nèi)炎癥，注射一次pGLP-2微球能抑制DSS引起的小鼠結(jié)腸炎性評分的升高及結(jié)腸內(nèi)炎性因子IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-10 mRNA表達的增加。(3) DSS能破壞小鼠腸道完整性，注射一次pGLP-2微球能抑制由DSS引發(fā)的血液DAO含量、結(jié)腸MPO含量、結(jié)腸Claudin-1mRNA表達的增加及結(jié)腸Occludin、ZO-1 mRNA表達的降低。
　

7、　小結(jié):一次注射pGLP-2/PLGA微球能顯著抑制由DSS引發(fā)的體增重降低，結(jié)腸變短，腸道屏障破壞及體內(nèi)炎癥增加等不良影響。
　　試驗三:pGLP-2/PLGA微球?qū)PS誘導斷奶仔豬腸道損傷的保護作用
　　本試驗選取18頭斷奶仔豬，按體重隨機分為對照組、脂多糖組（LPS組）、微球組。對照組于第1天、第8天注射2 mL生理鹽水;LPS組于第1天注射2 mL生理鹽水，第8天腹腔注射100μg/kg BW的LPS;微球組于第1

8、天注射100 mg按理論載藥量為2％制備的微球，第8天腹腔注射100μg/kg BW的LPS。注射LPS3 h后，將仔豬屠宰，取注射LPS前后血液測定IL-6、IgA、DAO等指標;取十二指腸、空腸、回腸，一份用中性甲醛固定，進行常規(guī)石蠟切片，HE染色;一份提取RNA，進行RT-PCR。結(jié)果表明:(1) LPS組較對照組仔豬十二指腸、空腸的絨毛高度及絨毛隱窩比顯著降低，微球組較LPS組仔豬十二指腸絨毛隱窩比顯著提高，微球組回腸絨毛高度及

9、絨毛隱窩比LPS組及對照組顯著提高。(2)注射LPS后LPS組仔豬血液IL-6、IgA、DAO的含量顯著提高，而pGLP-2微球預處理的仔豬在注射LPS前以上血液指標無顯著變化。(3) LPS組較對照組空腸Occludin mRNA表達顯著降低，Clauidin-1、IL-8、TNF-α mRNA表達顯著增加，微球組較LPS組仔豬十二指腸ZO-1 mRNA顯著提高，空腸IL-8 mRNA表達顯著降低。
　　小結(jié):注射一次pGLP-