小鼠新生期變應原刺激對后期免疫功能的影響.pdf

1、變應性鼻炎(allergicrhinitis,AR)是耳鼻咽喉-頭頸外科的常見疾病之一,其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢,導致這一現(xiàn)象發(fā)生的根本原因尚未完全清楚?，F(xiàn)有的變應性鼻炎治療方法包括避免接觸變應原,藥物治療和免疫治療。藥物治療只能改善臨床癥狀而無法治愈疾病,變應原特異性免疫治療雖然是目前唯一對因治療,但其治療療程很長(3～5年),且有一定風險,許多患者不愿接受。因此,在積極尋找變應性鼻炎的更有效的治療方法的同時,越來越多的國內外學者將研

2、究重點放在如何預防變應性鼻炎發(fā)生發(fā)展方面。本研究基于變應原早期暴露對免疫系統(tǒng)的影響,結合變態(tài)反應性疾病(如哮喘、過敏性鼻炎)發(fā)生的免疫學基礎,提出假設:新生期預防性接種變應原,是否影響其成年后體內免疫反應,即增強特異性Th1、Treg反應,相對削弱Th2反應,并希望為變應性鼻炎的防治提供新的思路。
　　第一部分：從方法學上對小鼠變應性鼻炎模型進行研究,探討變應性鼻炎造模方法和脾臟單個核細胞加入不同的刺激劑培養(yǎng)后CD4+T細胞內細胞

3、因子表達的變化。采用卵清蛋白(OVA)腹腔注射及OVA生理鹽水滴鼻造成變應性鼻炎模型(包括模型加強組(AR加強組)和一般模型組(AR組)),AR加強組較AR組多一次OVA腹腔注射,對照組則采用生理鹽水替代OVA。在最后一次滴鼻后5分鐘內,主要觀察噴嚏、鼻涕、搔鼻等指標,反映小鼠行為學變化;采用ELISA法檢測血清中OVA特異性IgE、IgG1、IgG2a含量的變化;在末次滴鼻后取脾臟單個核細胞培養(yǎng),并分別加入卵清蛋白(OVA)和豆蔻酰佛

4、波醇乙酯(PMA)刺激脾臟單個核細胞增殖、分泌細胞因子,于培養(yǎng)4小時后取培養(yǎng)液,采用流式細胞儀檢測脾臟單個核細胞培養(yǎng)后CD4+T細胞內IL-4、IFN-γ、IL-10陽性細胞百分率。結果發(fā)現(xiàn),實驗組(AR加強組和AR組)與對照組相比,血清中OVA特異性IgE、IgG1、IgG2a抗體均明顯增高(P<0.05)。實驗組(AR加強組和AR組)脾臟單個核細胞加入PMA刺激培養(yǎng)后CD4+T細胞內IL-4陽性細胞百分率顯著性高于對照組(P<0.0

5、5),CD4+T細胞內IFN-γ陽性細胞百分率AR加強組比對照組顯著降低(P<0.05),AR組與對照組無顯著性差異,IL-4/IFN-γ比值AR加強組(0.13)高于AR組(0.09),實驗組均高于對照組(0.04),而CD4+T細胞內IL-10陽性細胞百分率AR組及AR加強組與對照組差異均無統(tǒng)計學意義;加入OVA刺激培養(yǎng)后CD4+T細胞內IL-4陽性細胞百分率AR組及AR加強組比對照組均顯著性增高(P<0.05),但升高幅度比加入P

6、MA的低,CD4+T細胞內IFN-γ陽性細胞百分率AR組和AR加強組與對照組均無統(tǒng)計學意義,IL-4/IFN-γ比值AR加強組(1.77)高于AR組(0.44),兩組均高于對照組(0.27),而CD4+T細胞內IL-10陽性細胞百分率AR組較對照組顯著性升高(P<0.05),AR加強組與對照組無顯著性差異。不同刺激劑體外刺激單個核細胞表達細胞因子的效應是不同的,受PMA刺激產生的細胞因子與對照組相比,差異比OVA刺激的顯著。AR加強組和

7、AR組血清中OVA特異性IgE及IgG1抗體均較對照組顯著增高,但AR加強組IL-4/IFN-γ比值高于AR組,說明AR加強組的Th2優(yōu)勢大于AR組,AR加強組的模型建立方法可能會增加Th2優(yōu)勢免疫的發(fā)生。
　　第二部分：是研究小鼠新生期暴露于變應原對脾臟T細胞亞群發(fā)育及免疫功能的影響。在小鼠新生期,對其皮下注射不同劑量(10μg,100μg,1000μg)的OVA抗原,并輔以氫氧化鋁免疫佐劑,待其成年后致敏激發(fā),通過采用ELIS

8、A法檢測血清中OVA特異性IgE、IgG1、IgG2a含量的變化及流式細胞儀檢測單個核細胞培養(yǎng)后CD4+T細胞內IL-4、IFN-γ、IL-10陽性細胞百分率,觀察其成年后T細胞亞群功能的變化,以反映早期抗原接種是否影響其成年后的體內免疫反應。結果發(fā)現(xiàn),血清中OVA特異性IgE、IgG1含量10μg劑量組、100μg劑量組與1000μg劑量組均較對照組明顯升高(P<0.5),且隨著接種抗原劑量的增大血清中OVA特異性IgE、IgG1含量

9、隨之降低;血清中OVA特異性IgG2a含量10μg劑量組、100μg劑量組與1000μg劑量組均較對照組升高,且隨著接種抗原劑量的增大血清中OVA特異性IgG2a含量隨之升高。10μg劑量組、100μg劑量組、1000μg劑量組脾臟單個核細胞加入PMA刺激培養(yǎng)后CD4+T細胞中IFN-γ陽性細胞百分率均較對照組顯著性降低(P<0.5),10μg劑量組的CD4+T細胞中IL-4陽性細胞百分率顯著性高于對照組(P<0.5),100μg劑量組

10、和1000μg劑量組的CD4+T細胞中IL-4陽性細胞百分率也較對照組升高,但差異無統(tǒng)計學意義;IL-4/IFN-γ比值10μg劑量組(0.18)高于100μg劑量組(0.15),100μg劑量組高于1000μg劑量組(0.06),三個劑量組均高于對照組(0.03),且隨著接種抗原劑量的增加IL-4/IFN-γ比值隨之減小;CD4+T細胞中IL-10百分率無統(tǒng)計學意義。加入OVA刺激培養(yǎng)后CD4+T細胞中IL-4陽性細胞百分率10μg劑

11、量組顯著性高于對照組(P<0.5),但升高幅度比加入PMA的低,100μg劑量組和1000μg劑量組也較對照組升高,但差異無統(tǒng)計學意義;CD4+T細胞中IFN-γ百分率10μg劑量組、100μg劑量組、1000μg劑量組均較對照組差異無統(tǒng)計學意義;CD4+T細胞中IL-10百分率100μg劑量組顯著性高于對照組(P<0.5),10μg劑量組和1000μg劑量組較對照組差異無統(tǒng)計學意義;IL-4/IFN-γ比值10μg劑量組(0.49)高

12、于100μg劑量組(0.42),100μg劑量組高于1000μg劑量組(0.28),三個劑量組均高于對照組(0.09),且隨著接種抗原劑量的增加IL-4/IFN-γ比值隨之減小。
　　綜上所述,10μg劑量組Th2優(yōu)勢免疫顯著高于100μg、1000μg劑量組,且隨著接種抗原劑量的增加,Th2優(yōu)勢免疫逐漸減弱。說明對于新生小鼠,皮下注射100或1000μg變應原可相對削弱Th2反應,從而對IgE介導的超敏反應起到緩解作用,對其變應