生命早期變應(yīng)原暴露對(duì)小鼠成年后免疫狀態(tài)的影響.pdf

1、變應(yīng)性疾病在全球范圍內(nèi)發(fā)病率為20％,近十年來(lái)有不斷攀升趨勢(shì),而變應(yīng)性鼻炎(allergic rhinitis,AR)作為最常見(jiàn)的變應(yīng)性疾病之一,其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。環(huán)境變應(yīng)原暴露對(duì)其發(fā)病的作用備受關(guān)注,尤其在生命早期。目前研究認(rèn)為,生命早期不同劑量變應(yīng)原刺激對(duì)后期變應(yīng)性鼻炎的發(fā)展有一定影響。本實(shí)驗(yàn)研究中,我們通過(guò)在生命早期給予不同劑量的變應(yīng)原刺激,觀察其對(duì)后期免疫功能狀態(tài)的改變情況。從而為將來(lái)預(yù)防性變應(yīng)原早期特異性免疫的應(yīng)用奠定理

2、論基礎(chǔ)。
　　第一部分:
　　【目的】本部分旨在掌握相關(guān)免疫指標(biāo)的ELISA檢測(cè)方法,用AR模型檢測(cè)此方法的靈敏度,為后續(xù)試驗(yàn)奠定基礎(chǔ);探索兩種AR模型小鼠各自免疫特點(diǎn)。
　　【方法】6周齡Balb/c雌性小鼠分為3組:AR模型組于第1、5、14、21天給予0.4mg/ml卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)生理鹽水輔以佐劑Al(OH)3腹腔致敏,第22-35天連續(xù)14天鼻腔滴入25mg/mlOVA生理鹽水進(jìn)行激發(fā);

3、AR模型加強(qiáng)組于第1、5、14、17、21天給予Balb/c小鼠0.4mg/mlOVA生理鹽水腹腔致敏,激發(fā)方法同模型組;對(duì)照組以生理鹽水代替。三組均于末次激發(fā)后24h收集血清樣本、脾臟單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)72h后手機(jī)細(xì)胞上清樣本,保存于-80℃。
　　【結(jié)果】(1)血清抗體:模型組和模型加強(qiáng)組血清中OVA特異性IgE、IgG1、IgG2a均:顯著升高,且模型加強(qiáng)組OVA特異性IgG1較模型組高。(2)脾細(xì)胞培養(yǎng)上清結(jié)果:模型組細(xì)胞上清

4、中IL4有上升趨勢(shì),IFN-γ無(wú)變化,IFN-γ/IL4比值下降但比模型加強(qiáng)組水平高,IL10有上升趨勢(shì);模型加強(qiáng)組細(xì)胞上清中IL4明顯升高且較模型組水平高,IFN-γ無(wú)變化,IFN-γ/IL4比值下降但比模型組水平低,IL-10顯著升高。
　　【結(jié)論】:模型組和模型加強(qiáng)組均造模成功;模型加強(qiáng)組追加一次腹腔注射后,ELISA方法仍能檢測(cè)出免疫指標(biāo)的微小差異,證實(shí)了此方法的可靠性和靈敏度,可用于后續(xù)試驗(yàn);模型組Th2反應(yīng)增強(qiáng),模型加

5、強(qiáng)組Th2功能增強(qiáng)的同時(shí)Treg細(xì)胞功能也得到加強(qiáng),可為將來(lái)側(cè)重Treg功能研究的模型提供參考。
　　第二部分:
　　【目的】本部分旨在觀察生命早期變應(yīng)原免疫接種對(duì)小鼠成年后免疫指標(biāo)的影響。
　　【方法】乳鼠出生后1天、8天、15天給予皮下注射,分為4組:小劑量組(10μgOVA+Al(OH)3),大劑量組(1000μgOVA+Al(OH)3),生理鹽水組(NS組),生理鹽水+Al(OH)3組(NS+AL組)。不同劑量

6、(10μg和1000μg)變應(yīng)原(卵清蛋白OVA)輔以佐劑Al(OH)3,5周齡時(shí)尾靜脈注射100μgOVA進(jìn)行激發(fā),NS組和NS+AL組激發(fā)時(shí)均以生理鹽水代替,一周后處死,收集血清樣本、脾臟單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)72h后收集上清樣本,保存于-80℃。
　　【結(jié)果】(1)血清抗體:大小劑量組血清中OVA特異性IgE、IgG1及IgG2a均較對(duì)照組(NS組與NS+AL組)顯著升高,小劑量組OVA特異性IgE和IgG1較大劑量組高,大劑量組O