百合LLAG1和LLGLO1基因——功能分析及RNAi載體構(gòu)建.pdf

1、百合為百合科百合屬多年生球根類單子葉植物，因花姿優(yōu)美，成為世界五大鮮切花之一，具有廣泛的市場(chǎng)。長(zhǎng)期以來，百合花形育種一直是人們關(guān)注的最重要的育種目標(biāo)之一，人們希望獲得具有更高觀賞價(jià)值的花卉新品種，比如重瓣花，它具有的高貴豐滿之美，促使人們?cè)诟鞣N花卉中都希望獲得重瓣的突變體。雖然有證據(jù)表明依據(jù)擬南芥、金魚草等雙子葉植物提出的ABC模型，并不完全適用于單子葉植物，但是仍然給人們?cè)趩巫尤~植物花發(fā)育相關(guān)基因的克隆和功能研究中提供了參考和借鑒。

2、 2004年荷蘭的Beneditol等克隆了百合(L> longiflorum)的一個(gè)C類基因LLAG1，2006年本實(shí)驗(yàn)室成功克隆了百合(L. longiflorum)花發(fā)育中的B類功能基因LLGLO1。本研究的目的之一是進(jìn)一步鑒定這兩個(gè)花發(fā)育相關(guān)基因的功能，我們以麝香百合(L> longiflorum)的反轉(zhuǎn)錄cDNA為模板，克隆了LLGLO1及LLAG基因的全長(zhǎng)cDNA片斷，并連接到表達(dá)載體pBI121，轉(zhuǎn)化煙草。由于時(shí)間批

3、次的差異，目前只獲得了40株LLGLO1-pBI121轉(zhuǎn)基因煙草。轉(zhuǎn)LLGLO1-pBI121的植株?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)初期和開花時(shí)間與野生型沒有明顯差別，但植株高度較野生型矮，而且花瓣和雄蕊長(zhǎng)度也較野生型短，而雌蕊的長(zhǎng)度與野生型幾乎沒有差別，所以能明顯的觀察到轉(zhuǎn)基因煙草柱頭突出花瓣和花藥0.1-0.4cm，另外轉(zhuǎn)基因煙草的花藥和柱頭膨大，子房較野生型也明顯膨大。這與RT-PCR檢測(cè)到該基因在第一、二、三輪花器官中均有強(qiáng)烈表達(dá)和在成熟心皮中也有高表

4、達(dá)的事實(shí)相符，但在轉(zhuǎn)基因煙草花中未看到對(duì)萼片的影響。 RNA干擾現(xiàn)象(RNAi)作為一種典型的轉(zhuǎn)錄后基因沉默(PTGS)調(diào)控方式，是一種古老、保守而又極其重要的外源核酸防御機(jī)制，廣泛存在于生物界。RNAi技術(shù)就是人為的引入RNA干擾信號(hào)分子siRNA來沉默同源基因的表達(dá)。在煙草中驗(yàn)證兩個(gè)基因功能的同時(shí)我們運(yùn)用RNAi技術(shù)進(jìn)一步研究LLGLO1和UAG1基因的功能。通過LLGLO1和LLAG1的同源比較，分別選取3′-665-11