甜瓜CmERFV-4和CmERFIII-15基因的克隆、載體的構(gòu)建及功能分析.pdf

1、植物激素乙烯在果實(shí)成熟和衰老過(guò)程中發(fā)揮重要的作用，通過(guò)乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑來(lái)引起乙烯反應(yīng)，使果實(shí)在色澤、質(zhì)地、風(fēng)味和香氣等方面發(fā)生顯著的變化。乙烯應(yīng)答因子(Ethylene-responsive factors，ERFs)是乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的下游組分，可以認(rèn)別和結(jié)合靶基因5'上游啟動(dòng)子順式作用元件GCC盒，從而調(diào)節(jié)多種功能基因的表達(dá)來(lái)調(diào)控果實(shí)的發(fā)育。
　　本研究從甜瓜品種河套蜜瓜成熟果實(shí)中克隆得到CmERFV-4、CmERFⅢ-15

2、基因cDNA，大小分別為554 bp、672bp，并分別構(gòu)建了超表達(dá)載體pPZP221(35 S-ERFV-4-NOS)、pPZP221(35 S-ERFⅢ-15-NOS)和RNAi載體pART27-ERFV-4、pART27-ERFⅢ-15。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明，CmERFV-4基因相對(duì)于其他組織在根中的表達(dá)量最高，相對(duì)于果實(shí)其它發(fā)育時(shí)期在40天時(shí)的表達(dá)量最高，而CmERFⅢ-15基因相對(duì)于其他組織在葉子中的表達(dá)量最高，相對(duì)

3、于果實(shí)其它發(fā)育時(shí)期在40天時(shí)的表達(dá)量最高。通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時(shí)表達(dá)技術(shù)，將含超表達(dá)載體和RNAi載體的農(nóng)桿菌菌液注射到果實(shí)中，注射部位表現(xiàn)出提早成熟性狀和推遲成熟性狀。定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明，分別超表達(dá)CmERFV-4、CmERFⅢ-15基因后，兩基因的表達(dá)量與對(duì)照相比，都有大幅度上升，表明外源導(dǎo)入基因得到了表達(dá)。分別干擾CmERFV-4、CmERFⅢ-15基因后，內(nèi)源CmERFV-4基因的表達(dá)量與對(duì)照相比上升，而內(nèi)源CmERFⅢ-15