“雙開關(guān)”調(diào)控的人肝癌“自殺基因”治療載體的構(gòu)建.pdf

1、　　本文首先研究了磷脂酰乙醇胺甲基轉(zhuǎn)移酶-2(PEMT2)啟動(dòng)子在正常肝細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、其它腫瘤細(xì)胞中的活性。發(fā)現(xiàn)該啟動(dòng)子在正常肝細(xì)胞中的活性較高，而其它細(xì)胞中活性較低，表明PEMT2啟動(dòng)子作為負(fù)調(diào)控的開關(guān)是適宜的。為進(jìn)一步增強(qiáng)其表達(dá)活性，構(gòu)建“雙開關(guān)”模型載體時(shí)在PEMT2啟動(dòng)子上游增加了白蛋白基因(ALB)的增強(qiáng)子。　　采用AFP基因啟動(dòng)子和增強(qiáng)子作為正調(diào)控“開關(guān)”、采用PEMT2啟動(dòng)子和白蛋白基因(ALB)增強(qiáng)子作為負(fù)調(diào)控“開關(guān)

2、”、采用單純皰疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因作為“自殺基因”，成功構(gòu)建了“雙開關(guān)”調(diào)控的人肝癌“自殺基因”治療載體?！　⊥ㄟ^“單開關(guān)”模型及“雙開關(guān)”模型載體對(duì)細(xì)胞的殺傷實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：無論是“單開關(guān)”還是“雙開關(guān)”載體，對(duì)產(chǎn)AFP的肝癌細(xì)胞系HepG2都具有非常明顯的殺傷作用。盡管在正常肝細(xì)胞中沒有檢測(cè)到AFP的表達(dá)，但是高劑量的更昔洛維(GCV)對(duì)正常肝細(xì)胞也有一定的殺傷作用，而“雙開關(guān)”模型載體較“單開關(guān)”模型載體對(duì)正常肝細(xì)胞系H