雄激素、雄激素受體及其相關(guān)miR-let-7a乳腺癌增殖關(guān)系的研究.pdf

1、第一部分：
　　 目的:
　　 研究雄激素受體(androgen receptor, AR)表達(dá)在不同雌激素受體(estrogenreceptor, ER)狀態(tài)乳腺癌中與各臨床病理特征間的關(guān)系及預(yù)后，探討雄激素受體在乳腺癌內(nèi)分泌治療中的指導(dǎo)作用。
　　 方法：
　　 從ER和PR陽(yáng)性的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌(invasive ductal carcinoma, IDC)病例中隨機(jī)選取111例為ER+組，從ER和

2、PR陰性病例中隨機(jī)選取113例為ER-組，共224例。采用免疫組化方法檢測(cè)AR、HER2、Ki67、p53中的表達(dá)，依據(jù)AR結(jié)果將ER+組再分為ER+AR+和ER+AR-兩個(gè)亞組，將ER-組再分為ER-AR+和ER-AR-兩個(gè)亞組，結(jié)合臨床病理資料進(jìn)行組間比較分析和預(yù)后分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.AR在浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為67.9％，在ER+組和ER-組分別為80.2％、55.8％，兩組差異有顯著性(P=0.

3、002); AR與ER蛋白表達(dá)(P＜0.001)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AR陽(yáng)性者體積小(P=0.007)，組織學(xué)分級(jí)低(P=0.001)，病理分期低(P=0.004)，AR狀態(tài)與Ki67、患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。雖然AR的表達(dá)與絕經(jīng)狀態(tài)差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但是在絕經(jīng)后乳腺癌病例中，AR的表達(dá)率(73.3％)高于絕經(jīng)前病例(62.0％)。
　　 2.在ER+組，AR陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤大小(P=0.01

4、5)，組織學(xué)分級(jí)(P=0.033)，分期(P=0.002)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.001)，接受內(nèi)分泌治療情況(P=0.007)相關(guān)，與其它臨床病理特征差異無(wú)顯著性(P＞0.05）。
　　 3.在ER-組，AR陽(yáng)性表達(dá)者組織學(xué)分級(jí)低(P=0.039)，其中組織學(xué)Ⅱ級(jí)者所占的百分比較高;AR表達(dá)與HER-2過(guò)表達(dá)(P=0.039)和絕經(jīng)狀態(tài)(P=0.016)相關(guān);AR表達(dá)與Ki67無(wú)相關(guān)性(P=0.157)，但在Ki67高表達(dá)者中A

5、R的陽(yáng)性表達(dá)率有降低趨勢(shì)。
　　 4.Kaplan-Meier生存分析顯示AR表達(dá)與無(wú)瘤生存有明顯相關(guān)性(P＜0.001)，在ER+組和ER-組，AR陽(yáng)性者均具有較好的預(yù)后(P＜0.001，P=0.046)。對(duì)224例患者和ER+組患者分別進(jìn)行COX多因素分析，結(jié)果顯示AR狀態(tài)是影響無(wú)瘤生存的獨(dú)立因素的獨(dú)立因素(95％置信區(qū)間，040-0.054，P=0.003;95％置信區(qū)間，0.03-0.512，P=0.004)。
　

6、　 結(jié)論：
　　 在不同激素狀態(tài)乳腺癌中檢測(cè)AR表達(dá)可作為有意義的指標(biāo)來(lái)估測(cè)預(yù)后、為選擇性指導(dǎo)臨床內(nèi)分泌治療和個(gè)體化治療提供理論依據(jù)。除了ER、PR、HER2在乳腺癌中表達(dá)，AR蛋白也應(yīng)成為乳腺癌常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目之一，在ER陰性乳腺癌發(fā)病機(jī)理和個(gè)體化激素治療的研究中具有較為重要的價(jià)值。AR可以作為指導(dǎo)臨床內(nèi)分泌治療新的靶標(biāo)，為不同ER狀態(tài)乳腺癌激素治療提供依據(jù)。
　　 第二部分：
　　 目的：
　　 研究雄

7、激素受體(androgen receptor, AR)與microRNA-let7a(miR-let-7a)之間的相互作用，AR活化后miR-let-7a及其下游靶基因?qū)R+AR+的乳腺癌MCF7細(xì)胞系增殖的影響。
　　 方法：
　　 本研究選擇雌激素受體(estrogen receptor, ER)陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞系，體外培養(yǎng)，用實(shí)時(shí)定量PCR(real timePCR，RT-PCR)驗(yàn)證miR-let-7a在雄激素二

8、氫睪酮(5alpha-dihydrotestosterone，DHT)組表達(dá)明顯上調(diào)。通過(guò)向MCF7細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染miR-let-7a高表達(dá)或低表達(dá)載體，應(yīng)用MTT檢測(cè)miR-let-7a對(duì)乳腺癌MCF7細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響;并應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染miR-let-7a前后乳腺癌細(xì)胞周期的變化。應(yīng)用Western blot的方法驗(yàn)證轉(zhuǎn)染miR-let-7a前后，其下游靶蛋白ER-α、c-Myc、k-ras表達(dá)的變化。本研究初步探討AR和le

9、t-7之間的相互作用以及AR/miR-let-7a下游靶基因的表達(dá)對(duì)抑制ER+AR+乳腺癌MCF7細(xì)胞生增殖的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.實(shí)時(shí)定量PCR顯示10-8mol/L雄激素刺激后，miR-let-7a mRNA水平表達(dá)是明顯上調(diào)的。提示AR活化信號(hào)可調(diào)節(jié)miR-let-7a的表達(dá)。
　　 2.MTT顯示miR-let-7a對(duì)MCF7細(xì)胞的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，抑制率呈時(shí)間相關(guān)性，即隨著時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞

10、生長(zhǎng)抑制率呈逐漸增高趨勢(shì)，miR-let-7a對(duì)MCF7細(xì)胞的抑制作用高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)。與對(duì)照組相比，miR-let-7a轉(zhuǎn)染組MCF7細(xì)胞中G1期細(xì)胞比例增高(73.59％)，S期細(xì)胞比例明顯降低(18.58％);對(duì)照組G1期65.98％，S期27.65％。miR-let-7aantisense oligonucleotides(ASOs)轉(zhuǎn)染組MCF7細(xì)胞中G1期細(xì)胞比例降低64.87％，S

11、期細(xì)胞比例明顯增高28.37％，對(duì)照組G1期72.42％，S期20.55％。提示miR-let-7a可能將MCF7細(xì)胞阻滯于G1期，miR-let-7a可能抑制細(xì)胞自G1期向S期轉(zhuǎn)化。
　　 3.未轉(zhuǎn)染miR let-7a的乳腺癌MCF-7細(xì)胞中Western blot分析結(jié)果顯示DHT處理組ER、c-Myc、k-ras蛋白表達(dá)減少，而DHT處理前后內(nèi)參GAPDH的條帶亮度幾乎無(wú)差異。miR let-7a過(guò)表達(dá)時(shí)，ER-α、c-

12、Myc、k-ras各蛋白的表達(dá)與對(duì)照組相比明顯降低，AR蛋白表達(dá)沒(méi)有明顯變化;相反，轉(zhuǎn)染miR let-7a抑制劑的MCF7細(xì)胞系中，ER-α、c-Myc、k-ras蛋白表達(dá)則增高，AR表達(dá)也有所增加。
　　 結(jié)論：
　　 1.雄激素是通過(guò)與其相應(yīng)的AR受體結(jié)合來(lái)發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)的，研究顯示AR活化信號(hào)可以明顯上調(diào)miR-let-7a的表達(dá)。miR-let-7a可以抑制乳腺癌MCF7細(xì)胞系的增殖，并使細(xì)胞周期阻滯于G1/