2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、目的:研究腺病毒介導(dǎo)的ING4和OSM雙基因共表達(dá)對(duì)SPC-A1肺腺癌裸鼠移植瘤的抑瘤增效和放療增敏作用及其分子機(jī)制。
  方法:構(gòu)建 AdTrack-CMV-ING4-poly-A-promoter(簡(jiǎn)稱 Ad-ING4)、AdTrack-CMV-poly-A-promoter-OSM(簡(jiǎn)稱 Ad-OSM)、 AdTrack-CMV-ING4-poly-A-promoter-OSM(簡(jiǎn)稱 Ad-ING4-OSM)單雙基因重組病毒

2、,將上述病毒轉(zhuǎn)染QBI-293A細(xì)胞,經(jīng)多輪感染擴(kuò)增、純化后測(cè)定效價(jià),-80℃保存?zhèn)溆?。用RT-PCR鑒定ING4/OSM基因在QBI-293A細(xì)胞中的有效表達(dá)。培養(yǎng)SPC-A1肺腺癌細(xì)胞,建立SPC-A1肺腺癌裸鼠移植瘤模型。對(duì)已成瘤的裸鼠隨機(jī)分組,共七組,分別是:PBS組、Ad組、ING4組、OSM組、放療組、ING4/OSM雙基因組、ING4/OSM+放療組。對(duì)各組裸鼠進(jìn)行抗腫瘤實(shí)驗(yàn),方案如下:(1)PBS組:瘤內(nèi)多點(diǎn)注射 PBS

3、液,劑量100ul/只,隔日一次,共五次;(2)Ad組、Ad-ING4組、Ad-OSM組、Ad-ING4/OSM雙基因組:瘤內(nèi)多點(diǎn)注射各重組腺病毒,劑量為1.0*108/100 ul/只,隔日一次,共五次;(3)放療組:抗腫瘤實(shí)驗(yàn)的第0 d對(duì)裸鼠進(jìn)行局部瘤體照射,劑量為10Gy/只,共一次;(4)Ad-ING4/OSM+放療組:瘤體內(nèi)多點(diǎn)注射Ad-ING4/OSM雙基因重組病毒,劑量劑量為1.0*108/100 ul/只,隔日一次,共五

4、次;治療5d后局部進(jìn)行瘤體照射,照射劑量同放療組。抗腫瘤實(shí)驗(yàn)開始后隔日用游標(biāo)卡尺測(cè)量各瘤體長(zhǎng)、短徑,計(jì)算體積,繪制瘤體體積-時(shí)間曲線,觀察抑瘤效果,治療結(jié)束5d后處死裸鼠摘取瘤體,稱重,計(jì)算抑瘤率,將摘取的瘤體切片,HE染色觀察各治療組的細(xì)胞凋亡情況,免疫組化檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白及腫瘤血管形成相關(guān)因子Bax、Bcl-2、Caspase-3、Fasl、Survivin、VEGF的表達(dá)。
  結(jié)果:成功構(gòu)建了載有ING4和OSM單雙基因的

5、重組腺病毒,各重組病毒效價(jià)均達(dá)到1.0~2.0*109/ml的病毒。RT-PCR證實(shí)ING4/OSM能夠在QBI-293A細(xì)胞中有效表達(dá)。裸鼠模型的抗腫瘤實(shí)驗(yàn)證實(shí)Ad-ING4、Ad-OSM、放療組、Ad-ING4-OSM、Ad-ING4-OSM聯(lián)合放療組均對(duì)肺腺癌SPC-A1裸鼠移植瘤有不同程度的抑制作用,且與PBS組、Ad-GFP空載體腺病毒組比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01), Ad-ING4-OSM基因組的抑瘤效應(yīng)明顯優(yōu)于Ad

6、-ING4和Ad-OSM基因組,呈現(xiàn)抑瘤疊加效應(yīng)(Q=1.10),而雙基因聯(lián)合放療組抑瘤效應(yīng)最強(qiáng),呈現(xiàn)放療增敏效應(yīng)(Q=1.04)。HE染色下觀察凋亡情況,不僅雙基因組較單基因組、Ad組、PBS組細(xì)胞凋亡明顯,而且雙基因聯(lián)合放療組較雙基因組、單獨(dú)放療組凋亡更明顯。分子機(jī)制檢測(cè)結(jié)果表明:Ad-ING4、Ad-OSM、放療組、Ad-ING4-OSM、Ad-ING4-OSM+放療組不僅均能明顯上調(diào)SPC-A1肺腺癌細(xì)胞促凋亡因子Bax、Cas

7、pase-3、FASL的表達(dá),并下調(diào)抑制凋亡的Bcl-2、Survivin蛋白的表達(dá),而且還能明顯下調(diào)腫瘤血管形成因子VEGF的表達(dá),雙基因組較單基因組、Ad組、PBS組調(diào)節(jié)上述因子的效果更明顯(P<0.01),雙基因聯(lián)合放療優(yōu)于單獨(dú)放療組、雙基因組(P<0.01)。
  結(jié)論:(1)成功構(gòu)建各基因重組腺病毒,并擴(kuò)增獲得大量高純度、高滴度的病毒液;(2)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)腺病毒介導(dǎo)的ING4/OSM雙基因共表達(dá)對(duì)SPC-A1肺腺癌裸鼠移

8、植瘤具有明顯的抑瘤增效和放療增敏作用;(3)抑瘤的分子機(jī)制可能與上調(diào)SPC-A1肺腺癌細(xì)胞促凋亡因子Bax、Caspase-3、Fasl的表達(dá)、下調(diào)抑制凋亡的Bcl-2、Survivin蛋白的表達(dá)及下調(diào)腫瘤血管形成因子VEGF的表達(dá)有關(guān)。
  本實(shí)驗(yàn)證實(shí)ING4/OSM雙基因?qū)Ψ伟┑闹委熜Ч麅?yōu)于單基因,具抑瘤增效作用,且聯(lián)合放療的治療效果最佳,具放療增敏效應(yīng),是理想的放療增敏劑,為今后臨床應(yīng)用雙基因聯(lián)合放療的治療方案提供了有效的實(shí)

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