Cypate-DOX-SiO2納米粒用于腫瘤診療的初步研究.pdf

1、目的：制備一種介孔二氧化硅納米粒，將其作為藥物載體并對(duì)其進(jìn)行PEG修飾，以具有近紅外熒光成像和光熱效應(yīng)的藥物Cypate和具有腫瘤治療作用的化療藥物阿霉素作為模型藥物，制備一種親水性好，具有近紅外成像、光熱效應(yīng)和化療效果的多功能治療腫瘤的納米粒新型給藥系統(tǒng)。
　　方法：以十六烷基三甲基溴化銨作為模板劑，正硅酸四乙酯作為硅源，氨丙基三乙氧基硅烷作為氨基引入劑，使其在一定pH水溶液中水解縮合，制備出介孔二氧化硅納米粒。然后以介孔二氧化

2、硅作為載體，通過(guò)酰胺反應(yīng)先后將Cypate、PEG偶聯(lián)在納米粒上，再通過(guò)浸漬法將阿霉素包載到介孔二氧化硅中，制成具有多功能效應(yīng)的納米粒，研究:①利用動(dòng)態(tài)光散射法、掃描電鏡、透射電鏡、氮?dú)馕綄?shí)驗(yàn)、傅立葉轉(zhuǎn)化紅外光譜(FTIR)等多種測(cè)試方法對(duì)納米粒的粒徑、zeta電位、形態(tài)、比表面積、介孔孔徑分布、酰胺鍵以及載藥量進(jìn)行了一系列表征研究。②利用紫外分光光度計(jì)法、熒光分光光度計(jì)法考察其在一定紫外和熒光范圍內(nèi)的吸收特性，考察了不同pH下Cyp

3、ate的紫外穩(wěn)定性，不同pH下DOX的熒光穩(wěn)定性，不同光照時(shí)間下納米粒的光穩(wěn)定性及升溫效應(yīng)，并在光照和非光照條件下考察了其的釋放行為。③利用DPBF熒光探針考察納米粒產(chǎn)生單線態(tài)氧的能力;通過(guò)MTT法考察了空白介孔二氧化硅納米粒、偶聯(lián)Cypate的介孔二氧化硅納米粒、單包載DOX的介孔二氧化硅納米粒以及偶聯(lián)Cypate且包載DOX的介孔二氧化硅納米粒的細(xì)胞毒性;通過(guò)紫外分光光度計(jì)法及熒光分光光度計(jì)法考察了納米粒的細(xì)胞攝取量和內(nèi)吞途徑;通過(guò)

4、DHE染色、AO染色來(lái)直觀體現(xiàn)光照激發(fā)條件下不同濃度納米粒產(chǎn)生單線態(tài)氧的變化。④將4T1細(xì)胞種入裸鼠皮下建立腫瘤動(dòng)物模型，用小動(dòng)物成像儀觀察多功能納米粒在裸鼠內(nèi)的組織分布及成像情況;將4T1細(xì)胞種入小白鼠皮下，將其作為腫瘤模型，用熒光分光光度計(jì)法測(cè)定Cypate在小鼠體內(nèi)的分布情況，采用高效液相色譜法測(cè)定DOX在小鼠體內(nèi)的分布。⑤將4T1細(xì)胞種入小白鼠皮下，將其作為腫瘤模型，研究不同給藥小組及光照及非光照條件下的抗腫瘤效果。
　　

5、結(jié)果：⑴制備空白介孔二氧化硅納米粒，粒徑為39.4±2.1 nm，電位為44.2±2.8mv，多分散系數(shù)為0.218、孔徑為2.6 nm及比表面積為241.5373 m2/g，經(jīng)過(guò)化學(xué)偶聯(lián)和包載制備了粒徑為44.3±1.6 nm，電位為12.7±4.8 mv，多分散系數(shù)為0.158的多功能納米粒，Cypate和DOX的載藥量分別為15％和10％。⑵經(jīng)過(guò)紫外和熒光分析方法分析，納米粒相對(duì)游離藥物具有較好的穩(wěn)定性。體外釋放研究中，納米粒粒相

6、對(duì)游離組具有明顯緩釋效果。⑶體外細(xì)胞學(xué)研究中顯示出多功能納米粒具有良好的細(xì)胞殺傷能力，其效果比單包載阿霉素和單偶聯(lián)Cypate的二氧化硅納米粒的效果好，說(shuō)明包載兩種藥后具有協(xié)同作用。⑷小動(dòng)物活體成像結(jié)果顯示包載兩種藥物的納米粒具有較好的靶向性和滯留效應(yīng)，而在組織分布藥物濃度測(cè)定中也顯示在腫瘤部位的濃度最高為體內(nèi)抑瘤試驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。⑸抑瘤試驗(yàn)中Cypate/SiO2可以消除腫瘤，但是腫瘤消除一段時(shí)間后容易復(fù)發(fā)，DOX@SiO2組雖可以抑制

7、腫瘤的生長(zhǎng)，但不能消除腫瘤，而Cypate/DOX-SiO2可以抑制腫瘤生長(zhǎng)最后消除腫瘤且不復(fù)發(fā)，顯示出獨(dú)特的治療效果。
　　結(jié)論：以自制介孔二氧化硅納米粒粒作為載體，將Cypate偶聯(lián)到其表面，再包載阿霉素后制備了兼具近紅外熒光成像、光熱治療作用和化療作用的多功能納米粒，其粒徑為44.3±1.6 nm，電位為12.7±4.8 mv，多分散系數(shù)為0.158。該納米粒具有較好的化學(xué)穩(wěn)定性和光穩(wěn)定性，并且具有良好的緩釋效果。在細(xì)胞試驗(yàn)