趨化因子受體CXCR7在肝癌生長中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、中國是世界上肝癌第一大國，肝癌死亡率高居惡性腫瘤死亡率的第三位。肝癌具有起病隱匿、潛伏期長、惡性程度高、進(jìn)展快等特點(diǎn)，大多數(shù)患者就診時(shí)已至中晚期。而術(shù)后居高不下的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)率是肝癌治療的難點(diǎn)之一，也是最終導(dǎo)致患者死亡的重要原因。因此，闡明肝癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的分子機(jī)制，尋求特異性早期診斷標(biāo)志物，對(duì)提高肝癌患者生存率、改善生活質(zhì)量均具有重要意義。
　　本課題組以遺傳背景相似而轉(zhuǎn)移潛能不同的人肝癌細(xì)胞系為模型，利用多種蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)和生物信息學(xué)

2、工具，篩選出一系列差異表達(dá)基因。本論文對(duì)其中一個(gè)差異表達(dá)基因CXCR7進(jìn)行研究，認(rèn)為CXCR7可能是一個(gè)重要的與肝癌發(fā)生及肝癌轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的基因。論文分三部分進(jìn)行論述:
　　第一部分:前言。這一章重點(diǎn)概述了腫瘤轉(zhuǎn)移理論，并提出惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程涉及多個(gè)趨化因子及其受體的異常表達(dá)。隨后，詳細(xì)介紹了趨化因子CXCL12及其受體CXCR4，證實(shí)腫瘤細(xì)胞可以利用趨化因子及其受體的特異性結(jié)合實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)端器官的特異性轉(zhuǎn)移。近幾年研究發(fā)現(xiàn)，CX

3、CL12尚存在CXCR7這一新的受體，在不同腫瘤中的研究提示，CXCR7能直接參與調(diào)節(jié)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。此外，對(duì)本論文研究中的人肝癌細(xì)胞模型的建模過程和人肝癌研究的動(dòng)物模型也進(jìn)行了簡述。
　　第二部分:CXCR7在人肝癌細(xì)胞系及臨床樣本中的表達(dá)情況及慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建。本部分選用12個(gè)不同轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細(xì)胞系，發(fā)現(xiàn)高轉(zhuǎn)移潛能的細(xì)胞系，CXCR7表達(dá)水平高;低轉(zhuǎn)移潛能或不轉(zhuǎn)移的細(xì)胞系，CXCR7表達(dá)水平低。在10例肝癌組織的臨床樣本

4、中，肝癌灶CXCR7表達(dá)水平較癌旁顯著提高。我們還選用48例肝癌組織及肝癌轉(zhuǎn)移組織芯片，通過免疫組化方法發(fā)現(xiàn)CXCR7表達(dá)量與肝癌轉(zhuǎn)移顯著正相關(guān)。本部分還分別構(gòu)建了干擾表達(dá)與過表達(dá)CXCR7的慢病毒載體pLKO.1-CXCR7shRNAs與pBabe-CXCR7，為探索CXCR7對(duì)肝癌發(fā)生發(fā)展的影響奠定基礎(chǔ)。
　　第三部分:CXCR7表達(dá)水平對(duì)人肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。體外研究顯示CXCR7能增強(qiáng)細(xì)胞的增殖能力，穩(wěn)定干擾CXCR

5、7表達(dá)，細(xì)胞增殖能力將被顯著抑制。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，靶向干擾CXCR7表達(dá)，細(xì)胞通過G1期阻滯降低自身的增殖能力，還可能通過抑制Akt的磷酸化、下調(diào)bcl-2表達(dá)、上調(diào)PARP-1表達(dá)介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。在裸鼠體內(nèi)，異源表達(dá)CXCR7的HepG2穩(wěn)定株能夠促進(jìn)皮下瘤的生長;靶向干擾CXCR7表達(dá)的LM3細(xì)胞，裸鼠皮下種植瘤的生長速度明顯減慢，瘤體的體積與重量較對(duì)照均顯著減小。因而我們推測(cè)CXCR7在肝癌的發(fā)生過程中起著一個(gè)重要的作用。

6、r>　　本研究工作的主要貢獻(xiàn)在于:發(fā)現(xiàn)CXCR7是促肝癌發(fā)生的蛋白，在肝癌細(xì)胞系與肝癌組織中，CXCR7的表達(dá)水平與肝癌的發(fā)生發(fā)展顯著正相關(guān)。在體外，CXCR7能提高肝癌細(xì)胞的增殖能力。在體內(nèi)，CXCR7能夠促進(jìn)HepG2細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的腫瘤生長;相應(yīng)地，CXCR7shRNAs能夠抑制LM3細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的腫瘤生長。我們將進(jìn)一步通過串聯(lián)親和純化(TAP)技術(shù)與蛋白芯片手段找尋CXCR7的相互作用蛋白及其所調(diào)控的信號(hào)通路，研究其促進(jìn)肝癌生