趨化因子受體CXCR4在大腸癌轉(zhuǎn)移中作用的研究.pdf

1、背景轉(zhuǎn)移既是惡性腫瘤的重要特征，也是惡性腫瘤難以治愈、導(dǎo)致患者死亡而亟待解決的關(guān)鍵問題。目前發(fā)現(xiàn)趨化因子受體不僅高表達(dá)于免疫細(xì)胞，在某些腫瘤細(xì)胞同樣也存在高表達(dá)。Muller于2001年首先闡述了趨化因子受體與乳癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系，揭示趨化因子受體與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。趨化因子受體CXCR4(CXCchemokinereceptor4，CXCR4)是組織表達(dá)最為廣泛的趨化因子受體之一，在多種惡性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移中都有很重要的作用。CX

2、CR4在腫瘤組織中的表達(dá)明顯高于正常組織，而腫瘤常見轉(zhuǎn)移部位均為CXCR4的配體基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(stromalcellderivedfactor-1，SDF-1)表達(dá)豐富的器官，SDF-1與CXCR4結(jié)合后可使細(xì)胞肌動(dòng)蛋白絲聚合，形成偽足，從而定向誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞遷移到特定的靶器官；此外，CXCR4與其配體SDF-1相互作用可以促進(jìn)局部新生血管作用，利于腫瘤生長(zhǎng)。因此，趨化因子受體CXCR4已成為研究抗腫瘤藥物的極具吸引力的新靶點(diǎn)。

3、 目的1.探討CXCR4在大腸癌組織中的表達(dá)及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移等臨床病理特征的關(guān)系。 2.探討CXCR4在三種大腸癌細(xì)胞中的表達(dá)及其對(duì)大腸癌細(xì)胞趨化遷移和增殖作用的影響。 3.探討小干擾RNA對(duì)大腸癌細(xì)胞SW480細(xì)胞CXCR4表達(dá)和遷移的抑制作用。 方法1.對(duì)63例大腸癌病例進(jìn)行回顧，以免疫組化SP法分別檢測(cè)63例大腸癌組織、25例大腸癌癌旁正常組織、17例肝轉(zhuǎn)移灶和15例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中CXCR4的

4、表達(dá)，分析CXCR4的表達(dá)與大腸癌不同臨床病理參數(shù)的關(guān)系，研究大腸癌CXCR4的表達(dá)與淋巴結(jié)、肝臟轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 2.以逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)三種大腸癌細(xì)胞株SW480細(xì)胞、SW620細(xì)胞、Lovo細(xì)胞mRNA表達(dá)；以Western蛋白印跡檢測(cè)三種大腸癌細(xì)胞株CXCR4蛋白表達(dá)；以流式細(xì)胞儀(FACS)分析三種大腸癌細(xì)胞株細(xì)胞表面CXCR4表達(dá)；體外細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)三種大腸癌細(xì)胞株遷移和運(yùn)動(dòng)性變化，研究大腸癌細(xì)胞

5、CXCR4的表達(dá)與其遷移能力的關(guān)系，MTT法檢測(cè)SDF-1對(duì)三種大腸癌細(xì)胞的增殖作用。 3.設(shè)計(jì)互補(bǔ)于CXCR4mRNA的小干擾RNA(smallinterferingRNA，siRNA)，以脂質(zhì)體LipofectinAMINE2000包埋后轉(zhuǎn)染人大腸癌細(xì)胞SW480，以逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后人大腸癌細(xì)胞SW480CXCR4mRNA表達(dá)的變化；以Western蛋白印跡檢測(cè)CXCR4蛋白表達(dá)的變化；以細(xì)胞遷

6、移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大腸癌細(xì)胞SW480遷移能力的變化。 結(jié)果1.在所有63例腫瘤組織標(biāo)本中，CXCR4表達(dá)陰性3例(4.7％)，弱陽(yáng)性7例(11.1％)，陽(yáng)性17例(27％)，強(qiáng)陽(yáng)性36例(57.2％)，染色主要在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，小部分標(biāo)本細(xì)胞膜也有少量染色。CXCR4在大腸癌中的表達(dá)與年齡、性別、組織學(xué)類型、分化程度均無(wú)明顯相關(guān)性，與Duke's(P＜0.01)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P＜0.01)、肝臟轉(zhuǎn)移(＜0.01)明顯相關(guān)。25例大腸癌癌旁正

7、常組織中，CXCR4表達(dá)陰性17例(68％)，弱陽(yáng)性8例(32％)。17例肝轉(zhuǎn)移灶中CXCR4的表達(dá)均呈強(qiáng)陽(yáng)性。15例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，CXCR4表達(dá)陽(yáng)性4例(26.7％)，強(qiáng)陽(yáng)性11例(73.3％)。 2.逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、Western蛋白印跡法及流式細(xì)胞儀分析大腸癌細(xì)胞SW480、SW620及Lovo的CXCR4表達(dá)均呈陽(yáng)性。三種方法檢測(cè)結(jié)果一致，其中大腸癌細(xì)胞SW480和SW620CXCR4高表達(dá)，大腸

8、癌細(xì)胞LovoCXCR4低表達(dá)。體外遷移實(shí)驗(yàn)提示SDF-1能趨化大腸癌細(xì)胞SW480和SW620發(fā)生明顯體外遷移(P＜0.01)，而大腸癌細(xì)胞Lovo體外遷移無(wú)明顯變化(P＞0.05)。SDF-1對(duì)大腸癌細(xì)胞SW480和SW620有明顯的增殖作用(P＜0.01)，而對(duì)大腸癌細(xì)胞Lovo無(wú)明顯增殖作用(P＞0.05)。 3.CXCR4-siRNA對(duì)SW480細(xì)胞CXCR4mRNA和蛋白表達(dá)及細(xì)胞遷移力均有明顯抑制作用(P＜0.01

9、)，其抑制效應(yīng)在不同濃度組問差別顯著(P＜0.01)。CXCR4-siRNA在終濃度為50nmol/L、100nmol/L和200nmol/L時(shí)對(duì)SW480細(xì)胞的遷移抑制率分別為20.5％、37.5％和52.9％。 結(jié)論CXCR4的上調(diào)表達(dá)可能參與了大腸癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。大腸癌細(xì)胞CXCR4表達(dá)水平與其遷移能力呈正相關(guān)，并且SDF-1對(duì)CXCR4高表達(dá)的大腸癌細(xì)胞有明顯的增殖作用。小干擾RNA通過下調(diào)CXCR4mRNA和蛋白的表達(dá)