結(jié)直腸癌細(xì)胞表達(dá)趨化因子受體CXCR4的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過檢測結(jié)直腸癌細(xì)胞株趨化因子受體CXCR4的表達(dá)和結(jié)直腸癌細(xì)胞株的趨化試驗(yàn)，觀察SU11248和EGF對結(jié)直腸癌細(xì)胞株CXCR4表達(dá)的影響，評價(jià)CXCR4在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的作用并探討其可能的調(diào)控機(jī)制。 方法： 1．培養(yǎng)結(jié)直腸癌細(xì)胞株HT-29， SW480，采用RT-PCR、免疫組織化學(xué)染色、 Western-Blot檢測結(jié)直腸癌細(xì)胞株的趨化因子受體CXCR4表達(dá)情況。采用SDF-1誘導(dǎo)的趨化試驗(yàn)?zāi)Ｐ蜋z測兩種結(jié)直

2、腸癌細(xì)胞的趨化活動。用抗CXCR4抗體封閉處理結(jié)直腸癌細(xì)胞后再進(jìn)行趨化試驗(yàn)。 2．經(jīng)低血清培養(yǎng)結(jié)直腸癌細(xì)胞后分別用EGF和SU11248處理，采用免疫組織化學(xué)染色、Western-Blot及RT-PCR檢測處理前后的結(jié)直腸癌細(xì)胞趨化因子受體CXCR4的表達(dá)情況：采用Western-Blot檢測處理前后的結(jié)直腸癌細(xì)胞相關(guān)的信號分子的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1．免疫組織化學(xué)染色顯示處于指數(shù)增殖期的HT29和SW480表達(dá)

3、CXCR4蛋白的細(xì)胞陽性率分別為48.7％和52.6％，著色強(qiáng)度由弱陽性到強(qiáng)陽性不等。RT-PCR檢測到結(jié)直腸癌細(xì)胞株表達(dá)趨化因子受體CXCR4mRNA。Western-Blot檢測到結(jié)直腸癌細(xì)胞株有趨化因子受體CXCR4蛋白表達(dá)。趨化試驗(yàn)表明SDF-1可以趨化結(jié)直腸癌細(xì)胞，CXCR4抗體可以拮抗SDF-1的趨化作用。和CXCR4單克隆抗體處理組及空白對照組比較，SDF-1處理組趨化的細(xì)胞數(shù)目顯著多于其他兩組(P<0.05)。CXCR4

4、單克隆抗體處理組及空白對照組趨化的細(xì)胞數(shù)目無顯著差異(P>0.05)。 2．免疫組織化學(xué)染色、Western-Blot的結(jié)果表明EGF可以提高結(jié)直腸癌細(xì)胞株趨化因子受體CXCR4的表達(dá)(P<0.05)，免疫組織化學(xué)染色、RT-PCR及Western-Blot的結(jié)果表明SU11248能降低結(jié)直腸癌細(xì)胞株的CXCR4的表達(dá)(P<0.05)。 結(jié)論： (1)結(jié)直腸癌細(xì)胞株HT-29、SW480有趨化因子受體CXCR4表