趨化因子及其受體在甲狀腺相關(guān)眼病中的作用研究.pdf

1、研究目的：通過(guò)檢測(cè)甲狀腺相關(guān)性眼病(TAO)患者與正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)和眼眶組織的趨化因子MIP-1α/CCL3、RANTES/CCL5及其受體CCR1在基因水平和CCR1在蛋白水平的表達(dá)，以及檢測(cè)在TNF-α、IFN-γ誘導(dǎo)前后及用MIP-1α/CCL3、RANTES/CCL5刺激前后，對(duì)TAO患者PBMC的MIP-1α/CCL3、RANTES/CCL5和CCR1基因表達(dá)的影響，初步探討趨化因子及其受體在TAO發(fā)病中的作

2、用，尋求治療TAO的新途徑。 方法：1.分離TAO患者和正常人的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，用瑞氏染色法鑒定和用臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)細(xì)胞活力；2.用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)比較正常人和TAO患者PBMC和眼眶組織在基因mRNA水平上表達(dá)MIP-1α/CCL3、RANTES/CCL5及其受體CCR1的差異；3.用免疫細(xì)胞化學(xué)/免疫組化的方法比較正常人和TAO患者PBMC及眼眶組織在蛋白水平上表達(dá)CCR1的差異；4.用實(shí)時(shí)熒光定量PCR

3、技術(shù)檢測(cè)TNF-α、IFN-γ、MIP-1α/CCL3、RANTES/CCL5作用前后TAO患者PBMC的MIP-1α/CCL3、RANTES/CCL5、CCR1基因表達(dá)變化。 結(jié)果：1.TAO患者和正常人PBMC的趨化因子MIP-1α/CCL3、RANTES/CCL5及其受體CCR1的基因檢出率為100％，TAO組的RANTES/CCL5的表達(dá)較正常組增高(P＜0.05)； 2.TAO患者和正常人的眼眶組織的趨化因子M

4、IP-1α/CCL3、RANTES/CCL5及其受體CCR1的基因檢出率為100％，兩組間差異無(wú)顯著性(P＞0.05)； 3.TAO患者和正常人PBMC的趨化因子受體CCR1在蛋白水平上的陽(yáng)性表達(dá)率分別為76.92％和77.78％，差異無(wú)顯著性(P＞0.05)； 4.TAO患者眼眶組織中成纖維細(xì)胞、單個(gè)核細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的CCR1在蛋白水平上的陽(yáng)性表達(dá)率分別為46.15％、61.54％及76.92％，正常人眼眶組織CC

5、R1不表達(dá)或弱表達(dá)，TAO眼眶組織中CCR1的表達(dá)比正常人顯著增高(P＜0.05)； 5.TNF-α、IFN-γ可在體外誘導(dǎo)TAO患者PBMC產(chǎn)生趨化因子MIP-1α/CCL3、RANTES/CCL5，并改變CCR1的表達(dá)；RANTES/CCL5可刺激TAO患者PBMC的RANTES/CCL5基因表達(dá)增高，對(duì)CCR1、MIP-1α/CCL3無(wú)明顯作用；MIP-1α/CCL3刺激TAO患者PBMC對(duì)CCR1、MIP-1α/CCL3

6、、RANTES/CCL5的基因表達(dá)無(wú)明顯影響。 結(jié)論：1.TAO患者的PBMC的RANTES/CCL5基因表達(dá)增高，TAO患者的眼眶組織中成纖維細(xì)胞、單個(gè)核細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞上CCR1蛋白表達(dá)增高，而TAO患者的PBMC的MIP-1α/CCL3基因表達(dá)與正常人無(wú)明顯差異，說(shuō)明趨化因子RANTES/CCL5及其受體CCR1可能在TAO的發(fā)病中起了關(guān)鍵作用，而MIP-1α/CCL3在TAO的發(fā)病中的作用不明顯； 2.TNF-

7、α、IFN-γ可誘導(dǎo)TAO患者PBMC產(chǎn)生MIP-1α/CCL3、RANTES/CCL5，改變TAO患者PBMC的CCR1基因表達(dá)，說(shuō)明TNF-α、IFN-γ可協(xié)同趨化因子共同作用于TAO的PBMC，促進(jìn)TAO的發(fā)生發(fā)展； 3.RANTES/CCL5刺激TAO的PBMC后RANTES/CCL5進(jìn)一步增加，CCR1和MIP-1α/CCL3輕微增加，MIP-1α/CCL3刺激TAO的PBMC后MIP-1α/CCL3、RANTES/C