Chemerin在3T3-L1脂肪細胞分化過程中的表達改變及其與脂聯(lián)素、瘦素等關(guān)系的初步研究.pdf

1、目的:1.觀察chemerin及其受體chemerinR基因在小鼠各臟器中的表達情況；探討3T3-L1脂肪細胞分化成熟過程中chemerin及其受體基因表達的變化。2.探討PPAR-Y激動劑--羅格列酮對3T3-L1脂肪細胞chemerin及其受體基因表達的影響。3.重組chemerin蛋白對3T3-L1前脂肪細胞分化的影響并觀察其對脂聯(lián)素、瘦素和PPAR-γ2等基因表達的影響。
　　 方法:1.提取正常小鼠肝臟、脂肪、胃、脾臟

2、、腎臟、心臟、骨骼肌等臟器組織中總RNA,采用半定量RT-PCR技術(shù)檢測其中chemerin及chemerinR基因表達水平；體外培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細胞并誘導分化,實時熒光定量PCR法檢測誘導分化過程中不同天數(shù)(0、2、4、6、8、10天)chemerin和chemerinR基因的表達變化。2.3T3-L1細胞誘導分化至第10天為正常對照組；另一組在誘導分化過程中用10μM羅格列酮干預。采用實時熒光定量PCR法檢測不同天數(shù)(0、2、

3、4、6、8、10天)chemerin和chemerinR基因表達情況。3T3-L1脂肪細胞誘導成熟后,分別以不同濃度梯度(0、0.1μM、1μM、10μM)的羅格列酮干預24小時后收集細胞,實時熒光定量PCR法檢測chemerin和chemerinR基因的表達情況。3.3T3-L1細胞誘導分化至第10天為正常對照組；一組誘導分化過程中用羅格列酮干預；另一組予以chemerin蛋白干預。采用實時熒光定量PCR法檢測第10天PPAR-γ2、

4、C/EBPa基因以及adiponectin、leptin基因表達情況。3T3-L1細胞誘導成熟后,分別以不同濃度梯度(0、2.5ng/ml、25 ng/ml、50 ng/ml)的chemerin蛋白作用24小時后收集細胞,實時熒光定量PCR法檢測PPAR-γ2、C/EBPa基因以及adiponectin、leptin基因的表達情況。
　　 結(jié)果:1、chemerin及其受體基因在小鼠肝臟、脂肪、胃、脾臟、腎臟、心臟、骨骼肌中均有

5、表達； chemerin及chemerinR基因低表達于3T3-L1前體脂肪細胞中,并隨前體脂肪細胞誘導分化成熟表達水平呈逐漸上調(diào)趨勢(P<0.05)。2、與對照組相比羅格列酮組對3T3-L1前脂肪細胞誘導分化過程中及成熟的3T3-L1脂肪細胞chemerin和chemerinR基因均起上調(diào)作用(P<0.05)。3、與對照組相比在3T3-L1細胞誘導分化過程中第10天羅格列酮干預組、chemerin蛋白組均上調(diào)PPAR-γ2、C/EBP

6、a、adiporlectin、leptin基因的表達(p<0.05)。3T3-L1細胞誘導分化成熟后,與對照組相比chemerin蛋白組上調(diào)了PPAR-γ2、C/EBPa及adiponectin、leptin基因的表達(p<0.05)。
　　 結(jié)論:1.chemerin及其受體基因在小鼠脂肪組織中均有表達；在3T3-L1脂肪前體細胞分化過程中,chemerin及其受體基因表達逐漸上調(diào)。2.PPAR-γ激動劑-羅格列酮上調(diào)chem