糖基化終末產(chǎn)物對3T3-L1脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素分泌的影響.pdf

1、目的：本研究通過觀察在糖尿病機(jī)體內(nèi)含量明顯升高的糖基化終末產(chǎn)物（Advanced glycation end product，AGE）對小鼠3T3-Ll細(xì)胞中脂聯(lián)素（Adiponectin，APN）mRNA及蛋白表達(dá)的影響，來探討AGE致動脈粥樣硬化的可能作用途徑，以便為糖尿病動脈粥樣硬化的防治研究提供更多的理論支持。
　　 方法：糖孵育法[1]制備AGE-BSA，熒光分光光度計(jì)測量其熒光值，BSA作對照。將小鼠3T3-L1前脂

2、肪細(xì)胞體外培養(yǎng)并誘導(dǎo)分化為成熟的脂肪細(xì)胞。用含不同濃度梯度（50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml）AGE的培養(yǎng)液對成熟的脂肪細(xì)胞體外培養(yǎng)48h，以PBS和BSA作為陰性對照，分別收集細(xì)胞和上清液，用RT-PCR方法測量APN mRNA的表達(dá)，ELISA方法檢測培養(yǎng)液中APN的分泌情況。
　　 結(jié)果：1）熒光分光光度計(jì)測得AGE-BSA組的熒光值12.25遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于BSA組的熒光值0.42（分別稀釋10倍后），符合AG

3、E的熒光特性。2）3T3-L1前脂肪細(xì)胞體外分化成熟后，高倍鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)可見到明顯的脂滴，油紅O染色可見胞漿明顯著紅色。3）AGE干預(yù)成熟的脂肪細(xì)胞后，APN的mRNA水平較對照組明顯下降，而BSA對照組與PBS對照組APN mRNA的表達(dá)無差異，用50μg/ml AGE干預(yù)脂肪細(xì)胞后，APN mRNA的表達(dá)較對照組減少（P<0.05），當(dāng)AGE濃度達(dá)100μg/ml和150μg/ml時(shí)，APN mRNA的表達(dá)較對照組有顯著差異（P<