惡性嗜鉻組織腫瘤分子機(jī)制研究.pdf

1、[背景]
　　嗜鉻組織腫瘤(嗜鉻細(xì)胞瘤/副神經(jīng)節(jié)瘤)通常為良性,然而最新研究表明,嗜鉻細(xì)胞瘤,特別是副神經(jīng)節(jié)瘤惡性比例可達(dá)15-35％。惡性嗜鉻細(xì)胞瘤預(yù)后不容樂觀,且臨床表現(xiàn)和組織病理學(xué)缺乏早期特異性診斷依據(jù)與分子標(biāo)記。但在致病基因種系突變層面,多項(xiàng)大型隊(duì)列研究揭示SDHB基因突變與惡性嗜鉻組織腫瘤高度相關(guān);而在腫瘤發(fā)生機(jī)制層面,ERBB2過表達(dá)也與嗜鉻組織腫瘤惡性行為相關(guān)。
　　[目的]
　　1.分析中國(guó)人群嗜鉻組織

2、腫瘤SDHx基因突變率。
　　2.分析SDHB基因突變與惡性嗜鉻組織腫瘤相關(guān)性。
　　3.探討ERBB2在嗜鉻組織腫瘤發(fā)生中的分子機(jī)制。
　　[方法]
　　1.納入上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院內(nèi)分泌代謝科門診及住院散發(fā)嗜鉻細(xì)胞瘤/副神經(jīng)節(jié)瘤患者(2007年至2011年)272例,提取其外周血DNA,分析SDHx基因(SDHA、SDHB、SDHC、SDHD和SDHAF2)的外顯子序列,并進(jìn)行蛋白質(zhì)功能預(yù)測(cè)。

3、>　　2.應(yīng)用Realtime PCR和Western Blot技術(shù)在39例病理證實(shí)的嗜鉻細(xì)胞瘤中進(jìn)行篩選,篩選出ERBB2在mRNA和蛋白水平均表達(dá)均為強(qiáng)陽性的嗜鉻細(xì)胞瘤組織9例及ERBB2在mRNA和蛋白水平均表達(dá)陰性的嗜鉻細(xì)胞瘤組織9例。
　　3.采用Affymetrix Human Genome U133 Plus2.0芯片,分別檢測(cè)比較兩組標(biāo)本全基因組基因mRNA表達(dá)水平。
　　4.采用Partek Gs6.4分析

4、軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息學(xué)分析,篩選出和ERBB2表達(dá)相關(guān)的差異基因。應(yīng)用Gene Ontology數(shù)據(jù)庫和KEGG數(shù)據(jù)庫對(duì)這些差異基因基因進(jìn)行GO注釋和參與的信號(hào)通路進(jìn)行顯著性分析。
　　5.對(duì)差異最顯著的信號(hào)通路Focal adhesion pathway在嗜鉻細(xì)胞瘤組織蛋白質(zhì)水平進(jìn)行驗(yàn)證。
　　[結(jié)果]
　　1.272例散發(fā)嗜鉻細(xì)胞瘤/副神經(jīng)節(jié)瘤患者中,19例攜帶SDHx基因突變,SDHx基因在中國(guó)人散發(fā)嗜鉻細(xì)

5、胞瘤/副神經(jīng)節(jié)瘤突變率為7.0‰10例SDHB基因突變患者中,8例為惡性,SDHB基因突變攜帶者惡性發(fā)病率為80％。
　　2.分析ERBB2在嗜鉻細(xì)胞瘤中的表達(dá)情況,篩選出9例ERBB2表達(dá)強(qiáng)陽性的嗜鉻細(xì)胞瘤組織和9例ERBB2表達(dá)陰性的嗜鉻細(xì)胞瘤組織。
　　3.分析表達(dá)譜芯片結(jié)果,將ERBB2+組(ERBB2表達(dá)強(qiáng)陽性的嗜鉻細(xì)胞瘤組織,9例)數(shù)據(jù)與ERBB2-組(ERBB2表達(dá)陰性的嗜鉻細(xì)胞瘤組織,9例)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較,共得

6、到3729個(gè)差異基因,其中上調(diào)的差異基因1940個(gè),下調(diào)的差異基因1789個(gè)。
　　4.應(yīng)用Gene Ontology數(shù)據(jù)庫和KEGG數(shù)據(jù)庫對(duì)差異基因進(jìn)行GO注釋和參與的信號(hào)通路進(jìn)行顯著性分析,顯示這些差異基因參與調(diào)解了許多生物學(xué)過程,包括細(xì)胞粘附,細(xì)胞間信號(hào)傳遞,膠原纖維的組成等。其中,Focal adhesionpathway是差異最顯著的信號(hào)通路。
　　5.在嗜鉻細(xì)胞瘤標(biāo)本的蛋白質(zhì)水平上分析Focal adhesion

7、 pathway中的關(guān)鍵分子,結(jié)果顯示在ERBB2+組中FAK(Tyr397),Src(Tyr416),Akt(Ser473)和Erk1/2(Thr202/Tyr204)的磷酸化狀態(tài),顯著高于ERBB2-組。
　　[結(jié)論]
　　1.SDHx基因在中國(guó)人散發(fā)嗜鉻細(xì)胞瘤/副神經(jīng)節(jié)瘤突變率為7.0％。SDHB基因突變攜帶者惡性發(fā)病率為80％。
　　2.表達(dá)譜芯片分析顯示ERBB2表達(dá)強(qiáng)陽性和陰性的嗜鉻細(xì)胞瘤組織間存在顯著表達(dá)