雛鴕鳥免疫器官的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)及雞源NDV對雛舵鳥致病機(jī)理的研究.pdf

1、鴕鳥原產(chǎn)于非洲沙漠地帶，人類集約化養(yǎng)殖鴕鳥的歷史較其它動物如雞、牛、豬及馬屬動物等短的多，并且由于鴕鳥形體高大，活動范圍廣，給疾病研究工作的開展帶來諸多不便，因此，人們對鴕鳥許多疾病的研究目前還不完善，遠(yuǎn)不如對其它動物的疫病防治進(jìn)行的深入和全面。新城疫是國內(nèi)外鴕鳥養(yǎng)殖業(yè)最主要的傳染病之一，雛鳥的發(fā)病率高達(dá)50％，成鳥發(fā)病率為3％～6％，鴕鳥因?yàn)榻?jīng)常進(jìn)行戶外活動，不可避免的要與其他野鳥或家禽接觸，這可能會導(dǎo)致NDV在鴕鳥和其它動物之間相互

2、傳染。鑒于此，本研究以雛鴕鳥為試驗(yàn)動物，分為攻毒組(皮下注射雞新城疫標(biāo)準(zhǔn)毒株F<,48>E<,9>)和對照組，利用透射電鏡技術(shù)、放射免疫測定、組織化學(xué)法、免疫組化定位表達(dá)及原位缺口末端標(biāo)記等多種方法，從亞細(xì)胞、組織細(xì)胞及細(xì)胞因子等方面系統(tǒng)研究雛鴕鳥免疫器官的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及免疫細(xì)胞、神經(jīng)免疫調(diào)控和細(xì)胞凋亡在雞源NDV人工感染雛鴕鳥引起的機(jī)體免疫反應(yīng)中的作用。主要研究工作和結(jié)果包括以下幾個(gè)方面： 1.雛鴕鳥免疫器官的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)

3、本試驗(yàn)以對照組8W健康非洲雛鴕鳥為試驗(yàn)動物，通過光鏡和電鏡樣本制作，采用HE、Feulgen-Methylene blue及改良 Weigert 法染色，研究雛鴕鳥免疫器官結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。結(jié)果顯示：雛鴕鳥胸腺數(shù)量少，僅分布在頸后部兩側(cè)，聚集成團(tuán)，髓質(zhì)內(nèi)有較典型的Hassall氏小體。腔上囊在泄殖腔的上方形成頂壁和側(cè)壁，包著整個(gè)泄殖腔，不形成真正獨(dú)立的囊腔，囊腔皺襞表面有密集分布的乳頭狀突起，每個(gè)乳頭固有層內(nèi)有單個(gè)腔上囊小結(jié)分布。脾臟實(shí)質(zhì)內(nèi)有大

4、量類似橢球的結(jié)構(gòu)，與周圍淋巴組織之間形成均質(zhì)淡染的嗜酸性物質(zhì)。經(jīng)特殊染色顯示及電鏡觀察發(fā)現(xiàn)該嗜酸性物質(zhì)含有膠原纖維的成分，此結(jié)構(gòu)在關(guān)于其他動物脾臟的文獻(xiàn)中未見報(bào)道。表明，鴕鳥免疫器官的外形及結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與其他動物之間存在較明顯的差異。 2.免疫細(xì)胞在雛鴕鳥抵抗雞源NDV防御反應(yīng)中的免疫調(diào)節(jié)作用 將試驗(yàn)動物隨機(jī)分為攻毒組和對照組。利用組織化學(xué)Feulgen- Methylene blue和改良Toluidine blue法分別

5、對試驗(yàn)雛鴕鳥免疫器官內(nèi)漿細(xì)胞 (PC)和肥大細(xì)胞(MC)進(jìn)行特殊染色。結(jié)果顯示如下： (1) 脾臟內(nèi)PC主要位于紅髓。胸腺皮質(zhì)部及皮質(zhì)與髓質(zhì)交界處PC數(shù)量較多，密集分布。腔上囊內(nèi)PC散在分布于整個(gè)腔上囊小結(jié)。雛鴕鳥接種雞源NDV 1～7d，脾臟內(nèi)PC數(shù)量明顯低于對照組。胸腺髓質(zhì)部PC數(shù)目從病毒接種第3d開始急劇下降，第5d降至最低，之后，PC開始增多。腔上囊小結(jié)內(nèi)PC數(shù)量先降低后增加，至第9d恢復(fù)與對照組相當(dāng)。上述結(jié)果表明，免疫

6、器官內(nèi)PC數(shù)量多，分布廣；機(jī)體感染NDV，各免疫器官內(nèi)PC數(shù)量減少，導(dǎo)致抗體生成和分泌降低，抑制體液免疫應(yīng)答。 (2)胸腺皮.髓交界處和髓質(zhì)部MC數(shù)量較多，密集分布。腔上囊內(nèi)MC主要分布在黏膜上皮，而脾臟內(nèi)MC主要位于淺層實(shí)質(zhì)，聚集分布。胸腺和腔上囊MC胞質(zhì)內(nèi)多含紫紅色顆粒，脾臟內(nèi)MC呈藍(lán)紫色，而同一器官不同部位MC的形態(tài)、大小也不同。雛鴕鳥人工感染雞源NDV，脾臟內(nèi)MC數(shù)量總體呈下降趨勢，胸腺和腔上囊內(nèi)MC均在病毒接種后3d明

7、顯減少，并分別于第3d和第5d降至最低，與對照組之間差異極顯著。以上結(jié)果表明，雛鴕鳥免疫器官內(nèi)MC存在異質(zhì)性；在病毒感染不同階段，MC數(shù)量的動態(tài)變化提示MC在雛鴕鳥抗雞源NDV的防御反應(yīng)及機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮重要作用。 3.雞源NDV人工感染雛鴕鳥對神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)的影響 采用免疫組織化學(xué)SABC法及放射免疫技術(shù)，對5-HT在鴕鳥免疫器官內(nèi)的定位分布及病毒接種期間攻毒組和對照組鴕鳥免疫器官內(nèi)5-HT表達(dá)和血清中IL-2水

8、平的動態(tài)變化進(jìn)行研究。發(fā)現(xiàn)，脾臟紅髓內(nèi)5-HT免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞(5-Htir)數(shù)量最多，陽性產(chǎn)物表達(dá)最強(qiáng)。胸腺內(nèi)5-Htir主要分布于皮質(zhì)和髓質(zhì)交界處的血管周圍及胸腺小葉間結(jié)締組織。腔上囊小結(jié)內(nèi)5-Htir數(shù)量極少，散在分布于髓質(zhì)。人工感染雞源NDV，脾臟內(nèi)5-Htir數(shù)目急劇下降，與對照組差異極顯著，且陽性產(chǎn)物表達(dá)減弱。胸腺內(nèi)5-Htir數(shù)量在病毒接種期間整體呈上升趨勢，陽性表達(dá)產(chǎn)物較對照組加強(qiáng)。腔上囊內(nèi)5-Htir在病毒接種初期減少

9、，隨后開始增加。血清中IL-2水平在病毒接種后第1d即開始下降，之后有所回升，但與對照組仍差異極顯著。結(jié)果表明，脾臟是免疫器官合成外周5-HT的重要場所，5-HT數(shù)量的動態(tài)變化提示5-HT參與了ND的發(fā)病過程，其數(shù)量及表達(dá)強(qiáng)弱與機(jī)體的病變進(jìn)程有關(guān)；IL-2在雞源NDV感染雛鴕鳥引起的免疫應(yīng)答反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，攻毒組鴕鳥血清中IL-2水平也與機(jī)體組織的損傷及疾病的病變程度密切相關(guān)。 4.雞源NDV人工感染雛鴕鳥對細(xì)胞凋亡的影響

10、 利用TUNEL法檢測攻毒組和對照組鴕鳥免疫器官及中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的細(xì)胞凋亡。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析顯示，攻毒組鴕鳥免疫器官內(nèi)凋亡細(xì)胞在病毒感染早期數(shù)量增加，隨后數(shù)量減少。脾臟內(nèi)淋巴細(xì)胞在NDV接種后5～7d凋亡細(xì)胞數(shù)量增加最明顯。胸腺內(nèi)淋巴細(xì)胞在病毒接種期間凋亡細(xì)胞數(shù)量均高于對照組，并且在病毒接種后1d即可檢測到大量凋亡的淋巴細(xì)胞。腔上囊內(nèi)凋亡細(xì)胞在病毒接種后1～7d均與對照組差異極顯著，除淋巴細(xì)胞凋亡外，還可檢測到大量凋亡的黏膜上皮細(xì)胞。