硼對(duì)雛鴕鳥(niǎo)下丘腦-垂體-卵巢軸的作用機(jī)理研究.pdf

1、非洲鴕鳥(niǎo)主要生活在非洲和酷熱的阿拉伯沙漠地帶。雌鴕鳥(niǎo)一般在2-2.5y時(shí)才達(dá)性成熟，是禽類(lèi)中性成熟最晚的動(dòng)物，其育雛期也很長(zhǎng)，為3mon。究竟是什么原因使得鴕鳥(niǎo)性成熟這么晚?其性腺必然有其獨(dú)特的性狀。服用雌激素可使血清17β-雌二醇、血清銅藍(lán)蛋白和甘油三酯水平明顯升高，補(bǔ)硼后，這些升高更為明顯；說(shuō)明硼有雌激素樣作用，并能增強(qiáng)雌激素的功能。因此，能否通過(guò)添加硼而提高鴕鳥(niǎo)的的養(yǎng)殖效益具有重要的科學(xué)意義。鑒于此，本研究以非洲雛鴕鳥(niǎo)為試驗(yàn)動(dòng)物，

2、分別添加硼酸Omg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L，利用透射電鏡技術(shù)、放射免疫測(cè)定、組織化學(xué)法、免疫組化定位表達(dá)及原位缺口末端標(biāo)記，免疫印跡等多種方法，從細(xì)胞、亞細(xì)胞、血清激素水平、蛋白分析等多個(gè)層面系統(tǒng)地研究雌性雛鴕鳥(niǎo)下丘腦.垂體.卵巢軸(HPO)的組織結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，以及添加硼酸后對(duì)HPO軸的作用機(jī)理。 主要研究結(jié)果如下： 1.硼對(duì)雌性雛鴕鳥(niǎo)下丘腦的影響本試驗(yàn)以45d雌性雛鴕鳥(niǎo)為試驗(yàn)動(dòng)物添加硼酸，石蠟切

3、片，HE染色、免疫印跡、免疫組化SABC法對(duì)MT1在雛鴕鳥(niǎo)下丘腦內(nèi)分布進(jìn)行定位，研究硼對(duì)雛鴕鳥(niǎo)下丘腦的影響及作用。結(jié)果顯示，下丘腦室旁核細(xì)胞單位面積數(shù)目在400mg/L組最高，差異不顯著。大、中型細(xì)胞率在200mg/L組最高，顯著高于其它3組；下丘腦視上核各組細(xì)胞單位面積數(shù)目在200mg/L組最高，與對(duì)照組相比差異非常顯著。大、中型細(xì)胞率在200mg/L組最高，400mg/L組主要以小型細(xì)胞居多；下丘腦弓狀核細(xì)胞單位面積數(shù)目在對(duì)照組最高

4、，200mg/L組次之，差異顯著；400mg/L組最少，差異極顯著，與對(duì)照組相比差異極顯著。對(duì)照組以小型細(xì)胞居多。室旁核褪黑素受體免疫陽(yáng)性細(xì)胞(MT1ir)細(xì)胞在陽(yáng)性強(qiáng)度表達(dá)方面，200mg/L組陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，差異極顯著，400mg/L，組MT1ir強(qiáng)度表達(dá)最弱，差異極顯著；視上核MT1ir數(shù)量以400mg/L組最多，排列密集，但是平均積分光度最低，細(xì)胞形態(tài)不完整，差異極顯著；弓狀核對(duì)照組MT1ir細(xì)胞數(shù)量最多，排列密集。100mg/L

5、組平均積分光度最高，陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)，差異不顯著。400mg/L組平均積分光度最低，差異顯著。結(jié)果表明室旁核、視上核在200mg/L組具有顯著促進(jìn)作用，但是400mg/L具有顯著抑制作用；弓狀核在100mg/L組時(shí)具有較小的促進(jìn)作用，400mg/L組具有顯著的抑制作用。 2.硼對(duì)雌性雛鴕鳥(niǎo)垂體的影響采用Peacse垂體染色、免疫印跡法、免疫組化SABC法對(duì)添加硼后雛鴕鳥(niǎo)腺垂體3種細(xì)胞及MT1在下丘腦內(nèi)分布進(jìn)行定位。Peacse法結(jié)果

6、顯示對(duì)照組內(nèi)嗜酸性細(xì)胞數(shù)量較多，細(xì)胞輪廓清晰，呈三角形或圓形。嗜堿性細(xì)胞大小不等，胞質(zhì)內(nèi)含有嗜堿性顆粒。嫌色細(xì)胞數(shù)量多，細(xì)胞體積小著色淡，細(xì)胞界限不清。添加硼100mg/L組嗜堿性細(xì)胞數(shù)量增多。200mg/L組嗜堿性細(xì)胞數(shù)量最多。400mg/L組嗜酸性、嗜堿性細(xì)胞成團(tuán)分布，嫌色細(xì)胞數(shù)量最少；SABC法結(jié)果顯示對(duì)照組腺垂體中的MT1ir細(xì)胞呈深淺不等的棕黃色，胞體呈不規(guī)則形，成堆或分散分布，陽(yáng)性免疫反應(yīng)顆粒主要分布在細(xì)胞核上，胞質(zhì)不著色。

7、100mg/L組腺垂體中的MT1ir細(xì)胞數(shù)目增多，免疫陽(yáng)性細(xì)胞較強(qiáng)。200mg/L組腺垂體中的MT1ir細(xì)胞數(shù)目增多，免疫陽(yáng)性細(xì)胞以強(qiáng)陽(yáng)性為主。400mg/L組腺垂體中的MT1ir陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目減少，免疫陽(yáng)性細(xì)胞以弱陽(yáng)性為主。結(jié)果表明：添加硼100mg/L、200mg/L組都能增加嗜堿性細(xì)胞的數(shù)目；添加100mg/L、200mg/L硼后MT1ir細(xì)胞數(shù)目呈遞增趨勢(shì)，強(qiáng)度也增強(qiáng)，但是400mg/L組對(duì)MT1ir陽(yáng)性細(xì)胞產(chǎn)生了抑制作用。

8、 3.硼對(duì)雛鴕鳥(niǎo)卵巢的影響制作光鏡和電鏡樣本，提取總蛋白，采用HE、免疫組化SABC、免疫印跡法，研究雌性雛鴕鳥(niǎo)卵巢的組織學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)以及添加硼酸對(duì)雛鴕鳥(niǎo)卵巢的作用。結(jié)果表明，添加添加100mg/L硼能夠增大卵巢的初級(jí)卵母細(xì)胞直徑，差異非常顯著，100mg/L硼能夠顯著增加原始卵泡的數(shù)目，200mg/L能夠顯著增加原始卵泡、初級(jí)卵泡、次級(jí)卵泡數(shù)目，并且各級(jí)卵泡的卵泡細(xì)胞以及卵母細(xì)胞MT1ir細(xì)胞強(qiáng)度比對(duì)照組顯著增強(qiáng)，400mg/L能夠顯

9、著減少原始卵泡數(shù)目。 4.添加硼后血清中E2、P4的變化采用放射免疫技術(shù)，在添加硼15d，30d，45d后檢測(cè)雛鴕鳥(niǎo)血清中E2、P4的變化。結(jié)果顯示添加硼15d后，100mg/L、200mg/L組與對(duì)照組相比血清中E2、P4水平都升高，差異不顯著。400mg/L組的E2水平降低，差異極顯著，P4差異不顯著；添加硼30d后，100mg/L、200mg/L以及400mg/L組與對(duì)照組相比血清中E2、P4水平差異都不顯著。添加硼45d

10、后，100mg/L、200mg/L組血清中E2水平與對(duì)照組相比升高，200mg/L組差異極顯著，400mg/L組的水平降低，差異不顯著。200mg/L、400mg/L組的P4水平與對(duì)照組相比降低，差異顯著。結(jié)果表明，適量添加硼能夠增加血清中E2水平，但是在添加量達(dá)到400mg/L的時(shí)候會(huì)降低血清中E2水平；添加硼15-30d時(shí)對(duì)P4的影響較小，但是添加到45d時(shí)血清內(nèi)P4水平顯著降低。 5.硼對(duì)雌性雛鴕鳥(niǎo)下丘腦-垂體-卵巢軸細(xì)胞