雛鴕鳥HPA軸的形態(tài)學(xué)、發(fā)育學(xué)及其在ND應(yīng)激下的調(diào)控機理研究.pdf

1、鴕鳥是世界上現(xiàn)存體形最大不能飛行的鳥綱動物，具有很高的飼養(yǎng)價值。雛鴕鳥由于各種生理機能尚未健全，抵抗力低，對機體內(nèi)外環(huán)境的變化和病原的侵襲非常敏感，容易發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)。因此，此階段下丘腦-垂體-腎上腺軸（HPA軸）功能的完善程度決定著機體的應(yīng)激反應(yīng)能力，最終影響雛鴕鳥的生長發(fā)育。新城疫（ND）是鴕鳥養(yǎng)殖業(yè)中最主要的傳染病之一，雛鳥的發(fā)病率高達(dá)50％。ND作為應(yīng)激原，進(jìn)入機體后可引起一系列病理變化，使機體HPA軸處于過度激活或失活狀態(tài)，進(jìn)一

2、步加重內(nèi)環(huán)境紊亂，引起病情加重。鑒于此，本研究以雛鴕鳥為試驗動物，分正常組（0d、45d和90d）和攻毒組（45d，皮下注射雞新城疫標(biāo)準(zhǔn)毒株F48E9），利用HE染色技術(shù)、透射電鏡（TEM）技術(shù)、組織化學(xué)技術(shù)、放射免疫測定（RIA）技術(shù)、免疫組化技術(shù)定位表達(dá)（SABC）技術(shù)及原位缺口末端標(biāo)記（TUNEL）技術(shù)等多種手段，從組織、細(xì)胞、亞細(xì)胞、細(xì)胞因子等方面系統(tǒng)研究雛鴕鳥HPA軸的形態(tài)結(jié)構(gòu)、發(fā)育特點及ND應(yīng)激下的調(diào)控機理。主要研究內(nèi)容和研

3、究結(jié)果包括以下幾個方面：
　　 1、雛鴕鳥HPA軸的形態(tài)結(jié)構(gòu)
　　 本試驗以1d、45d和90d健康非洲雛鴕鳥為試驗動物，通過光鏡和電鏡樣本制作，采用石蠟切片及HE技術(shù)，研究雛鴕鳥HPA軸的形態(tài)結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示：雛鴕鳥HPA軸有其自身的特點，其腎上腺結(jié)構(gòu)與其它鳥類的有差異。雛鴕鳥的左右腎上腺形態(tài)、大小、位置有一定的差異，左側(cè)腎上腺呈長橢圓形，右側(cè)腎上腺呈三角形或扁橢圓形，較左側(cè)的寬，重。腎上腺實質(zhì)由腎間組織（皮質(zhì)）和嗜鉻細(xì)

4、胞（髓質(zhì)）交錯排列，腎上腺皮質(zhì)組織分為周圍帶和中央帶，周圍帶可分為外區(qū)（被膜下帶）和內(nèi)區(qū)。周圍帶外區(qū)細(xì)胞的排列似乎與哺乳動物球狀帶的相似，內(nèi)區(qū)細(xì)胞排列相似于哺乳動物束狀帶的，中央帶細(xì)胞排列相似于哺乳動物網(wǎng)狀帶的，這是鴕鳥腎上腺成帶的重要標(biāo)志。相比于位于腎上腺內(nèi)層（周圍帶內(nèi)區(qū)和中央帶）的細(xì)胞，被膜下帶細(xì)胞的胞質(zhì)染色較淡，且含有若干空泡。此外，和中央帶細(xì)胞不同，被膜下帶細(xì)胞似乎含有更多的線粒體和較少的脂滴。腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞排列成索，含有兩種嗜

5、鉻細(xì)胞，即腎上腺素細(xì)胞和去甲腎上腺素細(xì)胞。它們均含較豐富的細(xì)胞器和大量的分泌顆粒，顆粒表面有膜包裹，內(nèi)含核芯。其主要區(qū)別：腎上腺素細(xì)胞的分泌顆粒，其核芯多位于中央，核芯與界膜之間有一狹窄的空暈；去甲腎上腺素細(xì)胞的分泌顆粒，其核芯偏于顆粒一側(cè)并貼于界膜上，而使顆粒的另一側(cè)留下一個較大的腔隙。以上結(jié)果表明，雛鴕鳥HPA軸的形態(tài)結(jié)構(gòu)與其它禽類的有差異，其腎上腺的形態(tài)結(jié)構(gòu)與部分哺乳動物的相似。
　　 2、雛鴕鳥HPA軸的發(fā)育特點

6、　　 本研究以1d、45d和90d健康非洲雛鴕鳥為試驗動物，利用HE染色技術(shù)、TEM技術(shù)、RIA技術(shù)、免疫組織化學(xué)SABC技術(shù)及TUNEL技術(shù)，研究雛鴕鳥HPA軸的發(fā)育特點。研究結(jié)果顯示：雛鴕鳥HPA軸組織學(xué)結(jié)構(gòu)隨日齡的增長而不斷完善，其在生后早期發(fā)育較快，45d時腎上腺皮質(zhì)分區(qū)明顯，髓質(zhì)明顯增多，細(xì)胞器明顯增多。不同日齡雛鴕鳥HPA軸內(nèi)均存在細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，但凋亡程度有所不同，1d鴕鳥下丘腦內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞凋亡較多（P<0.01），之后凋亡

7、逐漸減少；垂體內(nèi)細(xì)胞凋亡較少，凋亡呈增齡性減少；1d鴕鳥腎上腺內(nèi)的細(xì)胞凋亡較少，45d時凋亡明顯增多（P<0.01），90d時有所減少。不同日齡雛鴕鳥HPA軸內(nèi)均可檢測到GABA陽性產(chǎn)物，隨日齡的增長，其表達(dá)量呈增加的趨勢，平均積分光密度則在不同器官內(nèi)呈不同的規(guī)律性變化；下丘腦內(nèi)GABA陽性產(chǎn)物表達(dá)量較高，45d時的平均積分光度較高（P<0.01）；垂體內(nèi)GABA陽性產(chǎn)物表達(dá)量較低，其平均積分光度隨日齡逐漸下降；腎上腺內(nèi)GABA陽性產(chǎn)物

8、表達(dá)量較低，陽性信號呈增齡性增強，90d時平均積分光度達(dá)到最高（P<0.01）。雛鴕鳥血清ACTH和Cor水平隨年齡增長有明顯變化。1d鴕鳥血清ACTH水平在1～45d之間呈上升趨勢，之后下降至低于1d的水平（P<0.01）；雛鴕鳥血清Cor水平在1～45d之間呈下降的趨勢，之后漸回升到1d的水平。以上研究結(jié)果表明，隨著日齡的增長，雛鴕鳥HPA軸的結(jié)構(gòu)和功能不斷完善，其在生后早期發(fā)育較快。
　　 3、雛鴕鳥ND應(yīng)激下的HPA軸調(diào)

9、控機理
　　 將試驗動物隨機分為攻毒組和對照組。利用HE染色技術(shù)、TEM技術(shù)、RIA技術(shù)、免疫組織化學(xué)SABC技術(shù)及TUNEL技術(shù)，研究雛鴕鳥ND應(yīng)激下的HPA軸調(diào)控機理。研究結(jié)果顯示：NDV可引起雛鴕鳥HPA軸發(fā)生明顯的組織病理學(xué)變化，腎上腺病變較嚴(yán)重，下丘腦次之，垂體病變較輕，其病變程度顯示了雛鴕鳥HPA軸功能受損程度。雛鴕鳥感染NDV，HPA軸內(nèi)細(xì)胞凋亡數(shù)量在病毒感染期間明顯高于對照組，提示NDV能誘導(dǎo)雛鴕鳥HPA軸系統(tǒng)發(fā)

10、生細(xì)胞凋亡；在病毒接種后1d，腎上腺內(nèi)可檢測到大量凋亡細(xì)胞，接種5d后凋亡數(shù)量顯著增加（P<0.01），之后凋亡呈下降趨勢，腎上腺內(nèi)細(xì)胞凋亡的動態(tài)變化反映了雛鴕鳥HPA軸對ND病變的適應(yīng)和調(diào)節(jié)。雛鴕鳥感染NDV，HPA軸內(nèi)GABA表達(dá)均下降，腎上腺內(nèi)GABA陽性產(chǎn)物數(shù)量在接種后第1d急劇減少（P<0.01），至第3d最低（P<0.01），之后隨著病毒接種時間的延長，其表達(dá)量有所回升，但仍低于與對照組，腎上腺內(nèi)GABA表達(dá)量的消長規(guī)律提示