結(jié)核桿菌全菌裂解物和全脂質(zhì)抗原對人外周血單個核細(xì)胞活化和增殖的作用.pdf

1、背景及目的：由結(jié)核分枝桿菌(Mtb)感染所致的結(jié)核病是人類已知的最古老的傳染病之一,但至今其預(yù)防和治療仍不盡人意。近年來,結(jié)核病仍是世界范圍內(nèi)因感染單一病原體而死亡的最重要病因之一,且其患病人數(shù)持續(xù)增加。卡介苗作為唯一有效的保護性疫苗,已經(jīng)保護人類近一百年。世界衛(wèi)生組織(WHO)報道,對于兒童注射卡介苗進(jìn)行結(jié)核病預(yù)防是有效的,特別是較嚴(yán)重類型結(jié)核病(如結(jié)核性腦膜炎、粟粒性結(jié)核病),但對保護成人肺結(jié)核方面缺乏穩(wěn)定性。所以開發(fā)新型疫苗勢在必

2、行。目前對Mtb大部分疫苗和T細(xì)胞表位的研究都側(cè)重于由MHCⅡ類分子提呈的分泌到胞外的可溶性蛋白,對于胞壁中的抗原成分了解甚少。Mtb細(xì)胞壁中的脂質(zhì)結(jié)構(gòu),就像一層厚厚的保護莢膜,可以抵抗不利環(huán)境的侵害,這些脂質(zhì)成分具有免疫調(diào)節(jié)作用,在宿主固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)中都扮演著角色,提示脂類代謝可能是Mtb非比尋常的逃逸能力的核心。本實驗擬觀察Mtb全菌裂解物和全脂質(zhì)抗原對人外周血單個核細(xì)胞(PBMC)活化和增殖的作用,進(jìn)而初步探討脂類

3、抗原在結(jié)核感染中是否存在特異性作用。
　　方法：健康成人PBMC1×106/ml,分別加結(jié)核桿菌全菌裂解物10μg/ml或全脂質(zhì)10μg/ml進(jìn)行刺激,同時給予重組人白介素-2(rhIL-2)50 u/ml維持細(xì)胞增殖,另外設(shè)僅加rhIL-2的對照組,培養(yǎng)至第6、9、12天,收集培養(yǎng)擴增細(xì)胞,用流式細(xì)胞術(shù)檢測T細(xì)胞以及不同亞群的增殖情況和胞內(nèi)細(xì)胞因子(IFN-γ)的產(chǎn)生。
　　結(jié)果：兩組抗原刺激組均能刺激PBMC中T細(xì)胞的活

4、化和增殖,第9天時反應(yīng)最為明顯,與對照組相比,全菌裂解物組CD8+T細(xì)胞比例降低而CD4-CD8-T細(xì)胞比例明顯增高;全脂質(zhì)組CD4+T細(xì)胞以及CD4+CD8+T細(xì)胞比例增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。全菌裂解物早期可以有效地刺激γδT細(xì)胞迅速增殖,而全脂質(zhì)組與對照組相比γδT細(xì)胞有所降低(P<0.05)。培養(yǎng)至第12天,對分泌IFN-γ的細(xì)胞亞群分析,CD8+T細(xì)胞所占比例:全菌裂解物刺激組與全脂質(zhì)刺激組均高于其相應(yīng)的rhIL