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文檔簡介
1、目的:初步探討卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG)對高危HPV感染疾病的治療作用,尋求BCG治療抗HPV病毒的證據(jù)。研究在細(xì)胞水平上BCG激活的人外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)對HPV感染細(xì)胞的周期及凋亡的影響,并探討其對細(xì)胞中HPV-E7蛋白以及RB/E2F1通路的影響。
方法:選擇6個健康志愿者,抽取新鮮的外周血,用細(xì)胞分離
2、液分離出單個核細(xì)胞(PBMC),用卡介苗刺激PBMC5天作為BCG激活的殺傷細(xì)胞(BCG-activatedkiller cell,BAK),未刺激的PBMC作為自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell,NK)。激活的人外周血單個核細(xì)胞與高危HPV18感染轉(zhuǎn)化的宮頸癌細(xì)胞系HeLa細(xì)胞在不同濃度比下共同培養(yǎng)。相互作用20小時后,用MTS法分別檢測激活的外周血單個核細(xì)胞和未激活的外周血單個核細(xì)胞的殺傷率;收集作用后的HeLa細(xì)
3、胞,用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測細(xì)胞周期分布及凋亡情況;同時用實(shí)時熒光定量PCR和Western blot檢測HeLa細(xì)胞中E7基因以及RB/E2F1通路相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平變化。
結(jié)果:在效靶比(效應(yīng)細(xì)胞/靶細(xì)胞,E/T)分別為40∶1、20∶1、10∶1情況下,卡介苗激活的殺傷細(xì)胞(BAK)對HeLa細(xì)胞的殺傷率分別為24.08%、14.74%、6.8%,而未激活的外周血單個核細(xì)胞作為自然殺傷細(xì)胞(NK)的殺傷率分別為17
4、.62%、10.78%、5.8%。在效靶比為40∶1和20∶1時BAK細(xì)胞的殺傷率大于NK細(xì)胞,兩者差別有顯著性意義(P<0.05)。在20∶1效靶比相互作用下,收集HeLa細(xì)胞做周期及凋亡檢測顯示BAK組的凋亡率24.2%明顯高于NK組的凋亡率13.45%(P<0.05)。BAK細(xì)胞或NK細(xì)胞與HeLa細(xì)胞作用后均可使HeLa細(xì)胞周期抑制在G1期;且兩組HeLa細(xì)胞與空白對照組正常HeLa細(xì)胞比較RB、E2F1均有顯著性交化,RB表達(dá)
5、升高而E2F1表達(dá)下降。然而兩組的抑制作用以及兩組之間RB、E2F1的轉(zhuǎn)錄與翻譯水平變化無明顯差異(P>0.05)。然而,HPV-E7在轉(zhuǎn)錄水平各組間無差異(P>0.05),在蛋白表達(dá)量上BAK組和NK組比空白對照組稍有增加,但無顯著性差別(P>0.05)。
結(jié)論:在細(xì)胞水平上證明了用卡介苗激活的免疫細(xì)胞能夠殺傷高危HPV感染并整合的HeLa細(xì)胞,抑制細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡,而這個殺傷過程可能與RB/E2F1這條通路改變密切
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