腦啡肽能神經(jīng)元在吸入麻醉及應(yīng)激中的疼痛調(diào)節(jié)機制研究.pdf

1、疼痛是困擾臨床工作者的臨床癥狀之一，但其機制并不明確。雖然很多研究都揭示許多中樞結(jié)構(gòu)如皮層、下丘腦、導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)（periaqueductal grey,PAG）、延髓頭端腹內(nèi)側(cè)區(qū)（rostral ventromedial medulla,RVM）、脊髓等和多種神經(jīng)遞質(zhì)如腦啡肽（enkephalin,ENK）、5-羥色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）、去甲腎上腺素（norepinephrine,NE）、γ-氨基丁

2、酸（γ-aminobutyric acid,GABA）等及其相應(yīng)受體都參與到疼痛的調(diào)控過程，但是對于ENK能神經(jīng)元在吸入麻醉和應(yīng)激對疼痛調(diào)控中的作用機制仍不十分明確。
　　研究目的：
　　觀察七氟醚在吸入麻醉及強迫游泳應(yīng)激條件下前腦啡肽原(preproenkephalin,PPE)-綠色熒光蛋白（green fluorescence protein,GFP）轉(zhuǎn)基因小鼠脊髓及PAG內(nèi)Fos蛋白及ENK能神經(jīng)元的活化情況，并探討

3、其在疼痛調(diào)控過程中的作用機制。
　　研究方法：
　　疼痛是困擾臨床工作者的臨床癥狀之一，但其機制并不明確。雖然很多研究都揭示許多中樞結(jié)構(gòu)如皮層、下丘腦、導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)（periaqueductal grey,PAG）、延髓頭端腹內(nèi)側(cè)區(qū)（rostral ventromedial medulla,RVM）、脊髓等和多種神經(jīng)遞質(zhì)如腦啡肽（enkephalin,ENK）、5-羥色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）

4、、去甲腎上腺素（norepinephrine,NE）、γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）等及其相應(yīng)受體都參與到疼痛的調(diào)控過程，但是對于ENK能神經(jīng)元在吸入麻醉和應(yīng)激對疼痛調(diào)控中的作用機制仍不十分明確。
　　實驗一：PPE-GFP轉(zhuǎn)基因小鼠在吸入七氟醚處理后，進行福爾馬林實驗并檢測Fos蛋白在脊髓的分布，評價七氟醚對疼痛的調(diào)控作用。利用Fos與GFP免疫熒光雙重標(biāo)記用來檢測ENK能神經(jīng)元在七氟醚處理后的

5、活化狀態(tài)，并用非選擇性阿片肽受體拮抗劑納絡(luò)酮觀察阻斷ENK作用后小鼠行為學(xué)的改變。鞘內(nèi)注射七氟醚觀察行為學(xué)及ENK能神經(jīng)元的活化狀態(tài)，探討七氟醚在脊髓局部對疼痛的調(diào)控機制。
　　實驗二：PPE-GFP轉(zhuǎn)基因小鼠分別接受假游泳和強迫游泳處理，采用熱板測痛儀測定小鼠的熱痛閾值；應(yīng)用免疫熒光染色技術(shù)檢測兩組小鼠PAG中Fos陽性神經(jīng)元、Fos/GFP雙標(biāo)神經(jīng)元的分布特征及數(shù)量的變化。探討PAG內(nèi)ENK能神經(jīng)元在應(yīng)激調(diào)控疼痛中的作用。

6、r>　　研究結(jié)果：
　　實驗一：脊髓ENK能神經(jīng)元在七氟醚鎮(zhèn)痛調(diào)控中的作用
　　1.七氟醚均可以抑制福爾馬林誘發(fā)的雙相痛行為以及Fos蛋白在脊髓的表達，隨七氟醚的濃度增加其抑制作用明顯增強，呈濃度依賴關(guān)系。
　　2.小鼠吸入七氟醚后，ENK能神經(jīng)元與Fos蛋白具有共存關(guān)系，共存神經(jīng)元主要集中于脊髓的I～II層，而GFP的表達水平與氧氣處理組相比也明顯增加。納絡(luò)酮在一定程度上可反轉(zhuǎn)了七氟醚對痛行為的抑制作用。
　　

7、3.鞘內(nèi)注射七氟醚可對福爾馬林引起的痛行為反應(yīng)起到明顯的抑制作用，但其抑制作用并未被納絡(luò)酮所反轉(zhuǎn)，而在脊髓中未見到Fos蛋白與ENK能神經(jīng)元共存現(xiàn)象，GFP的水平也未見明顯變化。
　　實驗二：應(yīng)激引起的鎮(zhèn)痛效應(yīng)與腦啡肽能神經(jīng)元的關(guān)系
　　1.應(yīng)激組小鼠在應(yīng)激后10min，小鼠熱痛閾明顯升高到峰值，30min時逐漸下降，60min時降到應(yīng)激前時的基礎(chǔ)值。
　　2.免疫熒光染色結(jié)果顯示：小鼠在應(yīng)激后2h，PAG內(nèi)Fos陽性

8、神經(jīng)元和Fos/GFP雙標(biāo)神經(jīng)元明顯增多，主要集中于PAG腹外側(cè)區(qū)。
　　研究結(jié)論：
　　1.吸入七氟醚可對小鼠因福爾馬林引起的痛行為反應(yīng)起抑制作用。這種抑制作用與阿片肽有一定的相關(guān)關(guān)系，并可被非選擇性阿片肽受體阻斷劑納絡(luò)酮所阻斷。脊髓中ENK能神經(jīng)元，在七氟醚抑痛效應(yīng)中起到部分作用。但是，鞘內(nèi)注射七氟醚可升高疼痛閾值，但與阿片肽系統(tǒng)并無密切關(guān)系，也不能影響到脊髓ENK能神經(jīng)元的狀態(tài)。因此，脊髓ENK能神經(jīng)元參與七氟醚抗傷害