GDNF在慢性應激所致神經(jīng)元損傷中的作用.pdf

1、采用多因素慢性不可預見性應激方法建立動物模型（應激源：足底電擊、冰水游泳、高臺、斜籠、禁食、禁水、通宵照明，21天），探究慢性應激小鼠行為學的改變以及腦區(qū)海馬和前腦皮層神經(jīng)元膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（GDNF）表達的變化。并給予動物不同劑量中藥復方枳菊解郁湯和單味藥郁金和石菖蒲，通過開場、懸尾觀測各組小鼠的情緒改變、自覺活動和探索能力的改變；Morris水迷宮實驗觀測小鼠的空間學習記憶能力的改變；HE染色觀察小鼠海馬和前腦皮層神經(jīng)元形態(tài)

2、學變化；免疫組化測定GDNF在小鼠海馬和前腦皮層的表達情況，探討慢性應激和抑郁癥之間的關(guān)系以及枳菊解郁湯的抗抑郁作用機制。
　　研究結(jié)果：
　　1.應激組小鼠應激后即刻的水平活動次數(shù)、垂直活動次數(shù)、修飾次數(shù)均較對照組明顯降低，中央格停留時間明顯延長，糞便粒數(shù)顯著增多；應激結(jié)束后12 h和24 h應激組小鼠的水平活動次數(shù)、垂直活動次數(shù)與修飾次數(shù)減少，糞便粒數(shù)增加，但差異不具有統(tǒng)計學意義，而中央格停留時間顯著增加；應激結(jié)束后一周

3、，應激組小鼠的糞便粒數(shù)與中央格停留時間明顯增多，水平活動次數(shù)與垂直活動次數(shù)均明顯降低。
　　2.在應激后即刻，對照組小鼠和應激組小鼠在定位航行試驗中的逃避潛伏期均顯著降低；應激結(jié)束后12h、24h和應激結(jié)束后一周，對照組小鼠的逃避潛伏期明顯降低，而應激組小鼠的逃避潛伏期雖有下降趨向，但差異不顯著。與對照組小鼠相比，在應激后即刻，應激組小鼠空間搜索試驗中原平臺象限的停留時間明顯減少；應激結(jié)束后12h和24 h，應激組小鼠在原平臺象限

4、的停留時間雖有所降低，但無統(tǒng)計學差異；應激結(jié)束后一周，應激組小鼠在原平臺象限停留的時間明顯縮短。
　　3.與對照組小鼠相比，應激組小鼠海馬及前腦皮層神經(jīng)元數(shù)目減少，排列稀疏且比較散亂，細胞染色不均勻。在應激后即刻，應激組小鼠海馬和前腦皮層GDNF的陽性細胞數(shù)目和對照組小鼠相比較明顯減少，灰度值明顯增大；應激結(jié)束后12h和24h，應激組小鼠GDNF陽性細胞數(shù)減少，平均目標灰度值增多，但均沒有顯著差異。應激結(jié)束后一周應激組小鼠腦區(qū)的G

5、DNF陽性細胞數(shù)明顯減少，平均目標灰度值增加。
　　4.①在開場行為測試中，模型組小鼠開場行為各指標均較對照組相比有顯著性差異；氟西汀組和中藥中劑量小鼠開場行為各指標與模型組相比差異均有顯著性，高劑量組水平活動次數(shù)、垂直活動次數(shù)及中央格停留時間均有明顯差異：而低劑量組、郁金、石菖蒲組小鼠無明顯差異。②在懸尾試驗中，模型組小鼠在懸尾實驗中的第一次靜止不動時間和后4min累積不動時間較對照組相比均明顯增加。氟西汀組和復方中藥中劑量組小

6、鼠與模型組小鼠比較兩次不動時間均顯著減少；低劑量和高劑量組小鼠僅第一次靜止不動時間顯著減少；郁金組和石菖蒲組無顯著性差異。③在水迷宮實驗中，模型組小鼠的總路程和逃避潛伏期與對照組相比均明顯延長；原平臺象限停留時間顯著縮短。和模型組小鼠相比，氟西汀組和中藥中劑量組小鼠的總路程和逃避潛伏期具有顯著性差異；高劑量組的逃避潛伏期只是最后一天明顯縮短，低劑量組、郁金和石菖蒲組小鼠的總路程和逃避潛伏期無顯著性差異。與模型組相比，氟西汀組、中藥低、中

7、、高劑量組小鼠在原平臺象限停留的時間明顯延長，郁金組與石菖蒲組小鼠在原平臺象限停留的時間雖然延長但無顯著性差異。對照組小鼠經(jīng)過平臺的次數(shù)明顯多于模型組。與模型組小鼠相比，氟西汀組以及各藥物組經(jīng)過平臺的次數(shù)增多，且氟西汀組和中藥中、高劑量組小鼠具有顯著性差異。
　　5.對照組、氟西汀組、中藥中劑量組和高劑量組小鼠的海馬各區(qū)細胞排列整齊，細胞結(jié)構(gòu)完整，數(shù)目多，邊界清晰，核位居胞體的中央，染色深；前腦皮層的神經(jīng)元形態(tài)完整，層次緊密，染色

8、均勻。低劑量組、郁金組與石菖蒲組小鼠海馬和前腦細胞排列比較稀疏、松散，數(shù)量少，細胞間隙大，且染色較淺。模型組小鼠海馬與前腦皮層神經(jīng)元細胞變形，有的出現(xiàn)萎縮，細胞數(shù)目明顯減少，細胞間隙大，形態(tài)不規(guī)則，細胞染色淺，著色不均勻。
　　6.模型組小鼠腦內(nèi)海馬各區(qū)和前腦皮層的GDNF陽性細胞數(shù)目較對照組小鼠相比明顯降低，灰度值明顯增大；和模型組小鼠相比，各中藥組和氟西汀組小鼠海馬和前腦皮層GDNF陽性細胞數(shù)均有所增加，灰度值下降，以中藥中劑

9、量差異最為顯著，而中藥低劑量組、郁金組和石菖蒲組小鼠無顯著性差異。
　　研究結(jié)論：
　　1.慢性應激可引起小鼠在新異環(huán)境下的自發(fā)活動和探究能力明顯減弱，小鼠空間學習與記憶能力明顯受損。
　　2.慢性應激后可致小鼠海馬和前腦皮層神經(jīng)細胞產(chǎn)生明顯的形態(tài)學變化，海馬和前腦皮層GDNF表達明顯下降。
　　3.枳菊解郁湯可明顯改善慢性應激抑郁模型小鼠行為學的變化，明顯增強小鼠空間學習與記憶能力，表現(xiàn)出一定的抗抑郁效應。