人參皂苷Rg1對H-,2-O-,2-和Aβ-,25-35-誘導的ALZHEIMER細胞模型作用的研究.pdf

1、人們普遍認為，阿爾茨海默病(Alzheimer disease，AD)是一種神經系統(tǒng)退行性疾病，其發(fā)病機制極其復雜，主要病理學特征是神經元纖維纏結、老年斑產生和神經元丟失。Mlzheimer病(AD)患者腦中β-淀粉樣肽(AB)的異常增加與沉積是啟動AD神經退變不可逆病理發(fā)展過程的核心事件。而我國傳統(tǒng)中醫(yī)藥復古方——開心散是許多益智類古方中常用的組成之一，經古人的長期臨床實踐，證實有良好的益智作用。目前，關于開心散作用于AD模型的研究較

2、多，但有關開心散中的某一活性組分作用于AD的研究報道較少。本研究利用H<,2>O<,2>和AB<,25-35>致SK-N-SH細胞凋亡，制備具有擬AD樣病理變化的細胞模型，研究開心散的活性組分之一是人參皂苷Rgl對神經細胞損傷模型的保護作用，并探討其分子機制，為研究篩選對Alzheimer病(AD)等神經退行性疾病有治療作用的傳統(tǒng)藥物尋求實驗證據(更好的治療途徑)。 文中采用了以下研究方法：1.制備含人參皂苷Rgl有效藥物濃度的

3、培養(yǎng)基。2.AD細胞模型的制備：MTT法測細胞存活率，確定適當損傷細胞最佳造模條件(AB<,25-35>20 μM作用24小時，H<,2>O<,2>100μmol/L作用12小時)。3.各種指標的檢測：MTT比色法檢測細胞活力；應用流式細胞儀檢測細胞凋亡率；DNAladder觀察凋亡細胞的DNA片段化；化學比色法測定細胞培養(yǎng)液和細胞內丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性；RT-PCR檢測細胞淀粉樣肽蛋白前體(APP)基因、

4、中性內肽酶(NEP)基因的表達情況以及細胞bcl-2、baX的表達水平；Western Blot檢測細胞APP和NEP蛋白的表達情況。 研究結果表明：100μmol/LH<,2>O<,2>誘導SK-N-SH細胞12h，細胞活力下降(均P<0.01)，細胞凋亡率為16.3﹪，DNA斷裂呈片段狀，細胞培養(yǎng)液及細胞內MDA含量增加，SOD活性下降，細胞中bax表達明顯升高。20 μ mol/L Aβ<,25-35>誘導SK-N-SH細

5、胞24h，細胞活力下降(均P<0.01)，細胞凋亡率為33.9﹪，DNA斷裂呈片段狀，細胞培養(yǎng)液及細胞內MDA含量增加，SOD活性降低。而人參皂苷Rg1能提高細胞的存活率，減少細胞損傷，使細胞培養(yǎng)液及細胞內MDA含量將低，SOD活性提高(P<0.01)，RT-PCR結果顯示人參皂苷Rg1可降低bax、APP基因的表達并提高NEP基因的表達，同時Western Blot結果顯示人參皂苷Rg1可降低APP蛋白的表達并提高NEP蛋白的表達。得