人參皂苷Rg1對(duì)三維培養(yǎng)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的作用.pdf

1、　　目的：臨床中,由外傷或疾病引起的關(guān)節(jié)軟骨損傷很常見(jiàn),成人關(guān)節(jié)軟骨無(wú)血供,無(wú)淋巴液,也沒(méi)有神經(jīng)支配,損傷后的關(guān)節(jié)軟骨的修復(fù)能力非常弱,軟骨細(xì)胞幾乎不能自己修復(fù)損傷,隨著病情的發(fā)展這些損害將導(dǎo)致骨關(guān)節(jié)炎病,使患者生活質(zhì)量明顯下降。應(yīng)用組織工程技術(shù)治療關(guān)節(jié)軟骨缺損是目前被看好的方法之一,另一方面,臨床上中醫(yī)藥在骨關(guān)節(jié)病治療過(guò)程中也積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)。在此基礎(chǔ)上有必要從中西醫(yī)結(jié)合方面討論中醫(yī)藥對(duì)體外培養(yǎng)軟骨細(xì)胞方面的作用。本實(shí)驗(yàn)將SD大鼠關(guān)節(jié)

2、軟骨細(xì)胞接種于外消旋聚乳酸(PDLLA)支架中并在體外培養(yǎng),在人參皂苷Rg1的單獨(dú)作用下,通過(guò)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞計(jì)數(shù)、Ⅱ型膠原免疫組化等檢測(cè)手段,了解人參皂苷 Rg1 對(duì)三維培養(yǎng)中軟骨細(xì)胞表型的穩(wěn)定及增殖促進(jìn)作用。
　　方法：①SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨分離、培養(yǎng)。②倒置顯微鏡下觀察軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)狀況,并對(duì)培養(yǎng)的第三代軟骨細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。③收集第三代軟骨細(xì)胞種植于外消旋聚乳酸(PDLLA)支架中每日倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)情況。④倒置

3、顯微鏡,電鏡下觀察人參皂苷 Rg1 作用下軟骨細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。⑤免疫組織化學(xué)法觀察人參皂苷 Rg1對(duì)支架內(nèi)軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原表達(dá)的影響。⑥應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用t檢驗(yàn)和方差分析進(jìn)行組間比較。
　　結(jié)果：①單層培養(yǎng)貼壁后第5代、6代大多數(shù)細(xì)胞成纖維樣變,三維培養(yǎng)組連續(xù)培養(yǎng)6周HE染色顯示軟骨細(xì)胞形態(tài)始終保持圓形,軟骨細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)紫紅色異染,細(xì)胞核大且圓,有些區(qū)域出現(xiàn)細(xì)胞重疊生長(zhǎng)。②單層培養(yǎng)

4、6 周細(xì)胞Ⅱ型膠原免疫組化檢測(cè)細(xì)胞無(wú)棕黃色著色,呈陰性。③單層培養(yǎng)軟骨細(xì)胞短期內(nèi)的增殖速率明顯高于三維培養(yǎng)組(P　　結(jié)論：我們將SD大鼠關(guān)