淫羊藿苷在骨壞死微環(huán)境中對(duì)狗骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖與成骨分化影響的初步研究.pdf

1、目的：研究淫羊藿苷在骨壞死微環(huán)境中對(duì)狗骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)增殖與成骨性分化的影響。
　　 方法：12月齡清潔級(jí)健康雜種犬，雌雄不限，體重15-20Kg。利用液氮冷凍法制作狗股骨頭壞死模型，造模后2周于髂嵴上穿刺抽取骨髓10 mL，利用犬單個(gè)核細(xì)胞分離液分離單核細(xì)胞層細(xì)胞，常規(guī)傳代培養(yǎng)犬BMSCs。同時(shí)處死實(shí)驗(yàn)犬，取出壞死的股骨頭，無菌條件下切成小塊，放入10％FBS的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每隔3天換液1次，并收集壞死骨

2、培養(yǎng)液。取第2代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，更換含有5％壞死骨培養(yǎng)液的條件培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中淫羊藿苷終濃度分別為2.58、4.18、6.77、10.95、17.72μg/ml。增殖分析采用MTT法，于成骨性誘導(dǎo)培養(yǎng)第7天測(cè)細(xì)胞外堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性，第8天進(jìn)行細(xì)胞ALP染色，第14天進(jìn)行茜素紅染色及鈣化結(jié)節(jié)計(jì)數(shù)。
　　 結(jié)果：原代培養(yǎng)細(xì)胞呈典型成纖維細(xì)胞樣形態(tài)；壞死骨培養(yǎng)液可促進(jìn)BMSCs增殖，但對(duì)