腫瘤相關巨噬細胞誘導乳腺癌耐藥的作用及其機制研究.pdf

1、目的:探討腫瘤相關巨噬細胞(Tumor-associated macrophages,TAM)在乳腺腫瘤細胞耐藥中的作用及其分子機制。
　　方法:1、PMA、IL-4、IL-13刺激人單核細胞白血病細胞系THP-1,運用流式細胞術檢測細胞表面分子CD14、CD204、CD206的表達改變,建立TAM細胞模型;2、采用MTT法和Hoechst染色法觀察TAM細胞與乳腺腫瘤細胞T47D、BT-549直接接觸共培養(yǎng)、TAM培養(yǎng)上清與腫瘤

2、細胞共孵育體系中,TAM細胞對乳腺癌細胞系藥物耐受性的影響,進而運用Western Blot檢測TAM細胞對腫瘤細胞的STAT3、JNK磷酸化水平的影響,再用Real-Time PCR方法檢測TAM細胞對腫瘤細胞bcl-2基因表達的影響;3、通過ELISA法檢測TAM上清中IL-10含量的改變,并采用Real-Time PCR方法分析IL-10對腫瘤細胞抗凋亡基因bcl-2的調控作用,運用Western Blot檢測TAM細胞對腫瘤細胞

3、的STAT3信號通路的調控情況。
　　結果:1、經(jīng)PMA、IL-4、IL-13刺激后THP-1細胞表面CD14、CD204、CD206的表達水平增加,提示成功建立TAM細胞模型。2、TAM細胞或TAM培養(yǎng)上清與腫瘤細胞共培養(yǎng)均可顯著削弱紫杉醇對腫瘤細胞的殺傷,明顯下調其bcl-2基因表達水平以及凋亡信號JNK的磷酸化水平(p<0.05),同時顯著上調STAT3的磷酸化水平(p<0.05)。3、TAM細胞表達高水平IL-10,細胞毒

4、性分析顯示IL-10可顯著提高腫瘤細胞耐藥能力,同時上調腫瘤細胞抗凋亡基因bcl-2、抗凋亡蛋白p-STAT3的表達;若封閉TAM培養(yǎng)上清中的IL-10,腫瘤細胞的藥物敏感性顯著提高,且bcl-2表達水平下降,提示IL-10/bcl-2信號通路的激活可能是TAM細胞誘導耐藥的機制之一。
　　結論:本研究發(fā)現(xiàn)了TAM細胞在誘導乳腺癌耐藥中的重要作用,探討了IL-10介導的bcl-2信號通路在TAM細胞誘導乳腺癌耐藥作用中的關鍵作用,