酒精所致氧化應(yīng)激對(duì)高爾基體SPCA1的影響及神經(jīng)生長因子的保護(hù)作用.pdf

1、目的:
　　本論文研究旨在探索氧化應(yīng)激是否介導(dǎo)酒精對(duì)高爾基體SPCA1的影響，以及神經(jīng)生長因子是否具備改善酒精毒性的作用，為酒精相關(guān)疾病治療提供新思路。
　　方法:
　　1.培養(yǎng)小鼠神經(jīng)細(xì)胞瘤N2A細(xì)胞，建立酒精封閉系統(tǒng);
　　2.實(shí)驗(yàn)分三個(gè)模塊:急性酒精作用模塊、抗氧化劑NAC預(yù)處理模塊、神經(jīng)生長因子NGF預(yù)處理模塊;
　　3.光學(xué)顯微鏡、MTT法評(píng)價(jià)急性酒精作用對(duì)N2A細(xì)胞生存的影響;
　　4.熒

2、光顯微鏡、流式細(xì)胞儀觀察及檢測細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平;
　　5.多功能酶標(biāo)儀檢測細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的變化;
　　6.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測基因ATP2C1表達(dá)變化;
　　7.Western blot檢測蛋白SPCA1表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　1.急性酒精作用后，小鼠N2A細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)無明顯變化，MTT吸光度值變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說明酒精200mM濃度以下24h作用對(duì)小鼠神經(jīng)細(xì)胞瘤N2A細(xì)胞生存無明顯影響;

3、r>　　2.急性酒精作用后，各濃度酒精亞組均較空白組細(xì)胞熒光強(qiáng)度高，且隨酒精濃度上升逐漸增大，在酒精100mM濃度熒光強(qiáng)度增幅最大(16.3％)，隨后小幅下降。NAC預(yù)處理后，NAC1mM、2mM濃度下細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激相比單獨(dú)酒精作用無明顯變化，僅在NAC4mM濃度下細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激較單獨(dú)酒精作用組低，降幅為3.7％。
　　3.急性酒精作用后，各濃度酒精亞組均較空白組細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度增高，且隨酒精濃度上升逐漸增大，在100mM濃度

4、時(shí)增幅最大(22.4％)，隨后小幅下降。NAC預(yù)處理后，各濃度NAC亞組細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度均較單獨(dú)酒精作用組明顯降低，且下降程度隨NAC濃度上升逐漸增大，在4mM濃度降幅最大(31.8％)。NGF預(yù)處理后，各濃度NGF亞組的細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度均較單獨(dú)酒精作用組明顯降低，且下降程度隨NGF濃度上升逐漸增大，在50ng/ml濃度時(shí)降幅最大(31.4％)，隨后小幅下降。
　　4.急性酒精作用后，各濃度酒精亞組基因ATP2C1、蛋白S

5、PCA1表達(dá)水平均較空白組升高，且隨酒精濃度上升逐漸增大，在200mM濃度時(shí)達(dá)最大增幅(45％，34.9％)。NAC預(yù)處理后，各濃度NAC亞組基因ATP2C1、蛋白SPCA1表達(dá)水平均較單獨(dú)酒精作用亞組下降，且下降程度隨NAC濃度升高而增大，在4mM濃度下降幅度最大(30％，12％)。NGF預(yù)處理后，各濃度NGF亞組基因ATP2C1、蛋白SPCA1表達(dá)水平均較單獨(dú)酒精作用亞組升高，且上升程度隨NGF濃度升高而增大，在100ng/ml濃度