應(yīng)用嗜熱脂肪芽胞桿菌檢測原料奶中抗生素殘留的研究.pdf

1、本文主要應(yīng)用包埋的嗜熱脂肪芽胞桿菌芽胞檢測牛奶中的抗生素殘留，對營養(yǎng)物質(zhì)、指示劑添加量、包埋條件以及檢測條件等指標進行了研究，以提高此方法的靈敏度與穩(wěn)定性。然后通過與小樣發(fā)酵法、國標TTC法、試劑盒(ECLIPSE50)法、試紙條法四種方法作對照，統(tǒng)計陽性率，進一步確認本研究方法的可行性與靈敏度。 本試驗研究主要包括以下幾個方面的內(nèi)容： (一)首先將從普通微生物菌種保藏中心購買的試驗菌(ATCC12980=NCTC103

2、39)進行復(fù)壯、優(yōu)化，在胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，讓其在65℃(2、pH值7.2條件下生長，挑選生長比較快速的菌落。但嗜熱脂肪芽胞桿菌只形成針頭大小的菌落，為革蘭氏陽性菌。 (二)嗜熱脂肪芽胞桿菌芽胞的制備。本試驗，芽胞懸浮液中的營養(yǎng)菌體可選擇兩種方法除去，一是用溶菌酶法，二是加熱離心法。通過兩種方法的對比，并且考慮到成本因素，本文選擇加熱離心法。斜面菌種培養(yǎng)后，用生理鹽水洗下菌苔，振蕩，過濾，制成一定濃度的懸浮液進行加熱離

3、心制備芽胞。懸浮液70℃加熱10 min在有效除去營養(yǎng)菌體碎片的情況下比更高溫度、加熱更長時間下存活的芽胞數(shù)量多，效果最好。 (三)嗜熱脂肪芽胞桿菌芽胞包埋：通過對比卡拉膠、結(jié)冷膠、瓜爾膠和海藻酸鈣四種包埋劑的凝膠強度、擴散性以及操作的簡易程度，選擇海藻酸鈣作為嗜熱脂肪芽胞桿菌芽胞的包埋劑。 (四)營養(yǎng)要求的研究，利用正交試驗選擇的最優(yōu)營養(yǎng)液配方是：葡萄糖的添加量為1％，蛋白胨為1％。營養(yǎng)液的oH值控制在7.2左右，1.

4、6％的指示劑的添加量為每100mL營養(yǎng)液加入0.06mL。 (五)確定檢測條件：處理好的牛奶樣品檢測時，每個檢測小管內(nèi)添加0.2 mL紫色營養(yǎng)液，再加入牛奶樣品0.1 mL。在65℃水浴培養(yǎng)150 min。取檢樣200份，檢測時間為135 min，其中173份為陰性，27份為陽性，沒有可疑樣品，陽性率為13.5％，本研究方法具有可行性。 (六)穩(wěn)定性試驗：將制備好的檢測小管在4℃保存l周、2周、3周以及4周，記錄其陰性檢

5、測時間分別為前三周都是135 min，第四周檢測時間開始增加為150 min，但也在檢測時間范圍內(nèi)，所以本方法的檢測穩(wěn)定性為一個月。 (七)與小樣發(fā)酵法、國標(TIC)法、試劑盒法及試紙條法對照試驗：制備相同檢樣各40份，分別采取小樣發(fā)酵法、TTC法(國標GB5409-85)、試劑盒法(ECLIPSE50)和試紙條法(青霉素類)與本方法進行對照檢測其靈敏度。陽性率分別為小樣發(fā)酵法22.5％，TTC法25％，本方法23.75％，試

6、劑盒法26.25％，試紙條法32.5％. 本研究方法的靈敏度介于小樣發(fā)酵與試劑盒法之間，靈敏度具有可靠性。小樣發(fā)酵法的靈敏度較低，國標TIC法可疑樣品份數(shù)較多且操作比較復(fù)雜，菌液濃度難以控制。試劑盒法和試紙條法操作都比較簡單，其中試紙條法時間比較短，但它們經(jīng)過商品化，成本較高，適合于研究試驗室應(yīng)用，不便于在一般的養(yǎng)殖場和收奶站中推廣使用。 本課題目的在于根據(jù)現(xiàn)有的檢測方法對嗜熱脂肪芽胞桿菌檢測牛奶中抗生素殘留的方法加以改