甘肅甘草內(nèi)生菌有效菌種的篩選及藥效學研究.pdf

1、目的：通過對甘肅野生及栽培甘草內(nèi)生菌多樣性的研究，篩選出對金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌有抑菌作用的活性內(nèi)生菌，考察活性內(nèi)生菌的生理特性及成分，并以活性內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物與宿主植物有效成分進行小鼠肺炎藥效學對比研究，觀察甘草內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物與宿主有效成分之間的相關(guān)性，為解決甘肅野生甘草資源的匱乏和尋找甘草有效成分替代品提供實驗依據(jù)。
　　方法：1、采用NA、PDA培養(yǎng)基對甘草內(nèi)生菌進行分離和純化，通過分離頻率的比較尋找野生及栽培甘草各自的優(yōu)

2、勢菌株。
　　2、以金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌為靶標菌，采用定性和定量兩種抑菌方法，篩選出具有抑菌效果的活性內(nèi)生菌。
　　3、通過測定活性內(nèi)生菌的生長曲線、pH值范圍等等，研究活性內(nèi)生菌的生理特性。
　　4、利用HPLC法分析活性內(nèi)生菌的代謝產(chǎn)物，計算目標成分的含量，掌握活性內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物的成分分布情況。
　　5、通過肺指數(shù)、NOS含量、IL-6含量、病理切片等指標的觀察分析，研究活性內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物對小鼠肺炎的干

3、預(yù)作用。
　　結(jié)果：1、野生及栽培甘草中共分離到132株內(nèi)生菌，其中內(nèi)生細菌119株，內(nèi)生真菌13株，優(yōu)勢菌株為JTYB-001、JTYB-026、JTYB-060、JTYF-001、JTYF-006、JTZB-001、JTZB-049、JTZF-001。
　　2、野生及栽培甘草中篩選出的菌株JTYB-001、JTYB-053、JTZB-001對金黃色葡萄球菌均有抑制作用(P<0.05)，JTYB-001、JTZB-001對

4、肺炎鏈球菌也有抑制作用(P<0.05)。菌株JTYB-001和JTZB-001在MIC為2mg·ml-1的條件下能抑制金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌的生長，菌株JTYB-053在MIC為1mg·ml-1的條件下能抑制金黃色葡萄球菌的生長。
　　3、菌株JTYB-001在4～10h生長速度最快，至24h仍在緩慢生長。菌株JTYB-053在4～16h生長速度最快，在16h達到最大值，此后進入衰亡期。菌株JTZB-001在4～10h生長速度

5、最快，至24h仍在緩慢生長。
　　菌株JTYB-001、JTZB-001在pH值4-6時生長旺盛，pH值6-8時生長達到平衡，隨著pH值的繼續(xù)增大，其菌體生長呈下降趨勢。菌株JTYB-053在 pH值＜5時表現(xiàn)為弱生長，在 pH值5-6之間菌體生長旺盛，當pH值6-8時，菌體生長達到平衡，pH值>8時菌體生長呈下降趨勢。
　　4、菌株JTYB-001、JTYB-053、JTZB-001的RT值與甘草酸標準品RT值接近，判斷可

6、能三種菌株的發(fā)酵液中含有甘草酸，經(jīng)面積法計算三種菌株的甘草酸含量分別為0.033mg·ml-1，0.005mg·ml-1，0.013mg·ml-1。
　　5、菌株 JTYB-001、JTYB-053、JTZB-001均能降低小鼠肺指數(shù)(P<0.05)，肺組織中的NOS含量(P<0.05)和血清中的IL-6含量(P<0.05)，病理切片顯示三株菌代謝產(chǎn)物能夠減輕肺部的炎癥反應(yīng)。
　　結(jié)論：通過對甘肅甘草內(nèi)生菌的分離培養(yǎng)及多樣性